[发明专利]一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法有效
| 申请号： | 201010202366.9 | 申请日： | 2010-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN101885767A | 公开（公告）日： | 2010-11-17 |
| 发明（设计）人： | 何社辉;何毅华;陈克尧;何询 | 申请（专利权）人： | 深圳科兴生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/56 | 分类号： | C07K14/56;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 深圳市睿智专利事务所 44209 | 代理人： | 陈鸿荫 |
| 地址： | 518057 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，用于从可溶性表达重组人干扰素α1b的大肠杆菌工程菌中提取重组人干扰素α1b，包括细菌破碎、扩张床吸附、疏水柱层析、阴离子柱层析和凝胶过滤层析等步骤。本发明方法无需采用单克隆抗体胶，避免了单抗脱落造成的污染，利用Q Sepharose HP离子交换介质，应用缓慢的pH梯度能进一步分离干扰素相关蛋白质、异构体，使原液质量达到反相高效液相色谱法RP-HPLC检测单一主峰的纯度。采用该纯化方法提高了生产效率，降低了生产成本，提升了原液质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 取代 单克隆抗体 亲和 层析 分离 纯化 重组 干扰素 方法 | ||
【主权项】：
一种取代单克隆抗体亲和层析的分离纯化重组人干扰素α1b的方法，用于从可溶性表达重组人干扰素α1b的大肠杆菌工程菌中提取重组人干扰素α1b，包括如下步骤：A.利用高压匀浆机破碎含有重组人干扰素α1b的菌体；B.将步骤A获得的破碎菌体上样至Streamline扩张床吸附柱，使用NaCl盐梯度洗脱或一步法洗脱得到目标蛋白，优选采用一步法洗脱；C.将步骤B处理后得到的目标蛋白添加NaCl到2M至2.5M，经疏水柱层析，高盐浓度上样、低盐浓度洗脱；D.将步骤C处理后得到目标蛋白经阴离子柱层析，利用缓慢的pH梯度将重组人干扰素α1b与其相关蛋白质、异构体分离；E.采用Sephacryl凝胶过滤层析，去除高分子蛋白，获得重组人干扰素α1b原液。
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