[发明专利]一种重金属铜人工抗原的合成方法

摘要

一种重金属铜人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以二乙烯三胺五乙酸(DTPA)为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，成功合成了重金属铜的人工抗原，所制备的产品用于重金属的免疫分析方法研究。本发明合成步骤简洁，有效，可完全用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了方便的途径，可以满足国内对重金属免疫分析方法研究的需要。

主权项

一种重金属铜人工抗原的合成方法，其特征在于以二乙烯三胺五乙酸DTPA为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联；(1)重金属铜人工抗原的合成：称取0.147g的氯化铜溶于1mL浓硝酸中制备成铜离子溶液；称取6mg的DTPA至1.5mL离心管中，先加入10μL的10mol/L的KOH溶液，再加入990μL的p H 9.7、0.1mol/L的羟乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制备成DTPA螯合剂溶液；称取0.25g牛血清白蛋白BSA溶于5mL、0.1mol/L、pH值为7.4的HEPES溶液中制备成50mg/mL的BSA溶液；先往反应器中加入520μL的DTPA螯合剂溶液，再加入12μL的铜离子溶液，在室温下在磁力搅拌器上反应1h以上，形成半抗原反应液；往半抗原反应液中几乎同时加入500μL的BSA溶液和200μL的0.1mol/L、pH值为9.7的HEPES溶液，调节pH值至9.0；反应过夜后用Centricon‑30超滤离心管对蛋白质复合物进行分离纯化，即得重金属铜人工抗原；(2)重金属铜人工抗原的鉴定：重金属铜人工抗原采用凝胶电泳法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。