[发明专利]一种4-氨基偶氮苯人工抗原的合成方法

摘要

一种4-氨基偶氮苯人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以4-氨基偶氮苯为半抗原，用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了4-氨基偶氮苯的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对4-氨基偶氮苯研究的需要。

主权项

1.一种4-氨基偶氮苯人工抗原的合成方法，其特征在于以4-氨基偶氮苯为半抗原，用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比；(1)人工抗原的制备：A液：取4-氨基偶氮苯0.1mmol溶于2mL1，4-二氧六环中，冰浴，加入1M盐酸调pH2.0，冰浴，加入0.02M亚硝酸钠至淀粉试纸变蓝，4℃下，搅拌孵育30min，为A液；B液：牛血清白蛋白BSA0.001mmol溶于2mL、pH9.6、0.05mol/L的碳酸盐缓冲液中，4℃保存待用，为B液；将A液逐滴加入B液中，调pH9.0，然后置4℃下温孵半小时，室温反应4小时，即得4-氨基偶氮苯人工抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将4-氨基偶氮苯人工抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天，最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到4-氨基偶氮苯人工抗原；(2)人工抗原的鉴定：4-氨基偶氮苯人工抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。