[发明专利]中华鲟实时荧光PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及中华鲟实时荧光PCR检测试剂盒，包括含有5×FQ PCR buffer、浓度为10μM的DL基因引物混合物、浓度为10μM的荧光探针、浓度为10mM的dNTPS及ddH2O的PCRMIX反应液、Taq酶和阳性对照中华鲟DL基因扩增片段重组质粒。DL基因引物混合物含有上游引物和下游引物。用PCR MIX反应液24μL、Taq酶2μL，样品DNA提取液4μL，阳性模板为重组质粒，阴性模板为ddH2O，进行扩增反应；反应程序为：93℃反应2min，93℃反应30s，58℃反应45s，45个循环；Ct值小于35个循环且呈S型扩增曲线的鉴定为中华鲟，检测快速、高效、准确。

主权项

中华鲟实时荧光PCR检测试剂盒，其特征是包含如下试剂：(1)PCR MIX反应液：含有5×FQ PCR buffer、浓度为10μM的DL基因引物混合物、浓度为10μM的荧光探针、浓度为10mM的dNTPS及ddH2O；其中DL基因引物混合物含有上游引物和下游引物，所述上游引物DL-F序列为：5’-GATCAAGGTATGTCGATGACA-3’；所述下游引物DL-R序列为：5’-CAAGAACACAAGATTAATGAG-3’；所述荧光探针DL-P序列为：5’-CAGTCCTGCTTTTGGGGTTCGGCAAG-3’，其5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；(2)Taq酶；(3)阳性对照：浓度为1×107copies/mL的中华鲟的DL基因扩增片段重组质粒。