[发明专利]一种检测贝肉中镉-金属硫蛋白的酶联免疫吸附测定方法无效
| 申请号： | 201010227649.9 | 申请日： | 2010-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN101900726A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 吴晓萍;廖爱琳;廖艳;吴育廉;杨捷;梁鹏;邓楚津 | 申请（专利权）人： | 广东海洋大学 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543 |
| 代理公司： | 湛江市三强专利事务所 44203 | 代理人： | 庞爱英 |
| 地址： | 524025 广东省湛*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种检测贝肉中镉-金属硫蛋白的酶联免疫吸附测定方法，采用氯化镉诱导贝合成镉-金属硫蛋白，再用提纯的金属硫蛋白诱导兔合成抗体，再对抗体进行分离提纯，用达到电泳纯的兔抗贝金属硫蛋白抗体作一抗，用山羊抗兔酶标抗体作二抗，采用间接竞争型酶联免疫吸附法测定贝金属硫蛋白的含量。本发明的原理科学合理，技术步骤比较成熟，用于检测贝肉中的镉-金属硫蛋白含量，从而间接反应贝肉中镉的污染情况，这为贝肉中重金属镉的测定提供了一种快速灵敏的检测方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 贝肉中镉 金属 蛋白 免疫 吸附 测定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测贝肉中镉-金属硫蛋白的酶联免疫吸附测定方法，其特征包括如下步骤：(1)诱导选择0.5～2年的珍珠贝，对其注射100μl0.2～0.6mg/L的氯化镉，注射6～8次；(2)粗提将贝肉加Tris-HCl匀浆，4℃过夜，冷冻离心，取上清于70～90℃水浴3～5min，冷冻离心，上清液中加3倍体积乙醇，-20℃过夜，同上离心，沉淀用Tris-HCl溶解，再同上离心，上清即为镉-金属硫蛋白粗提液；(3)纯化粗提液先后经SephadexG-50、DEAE-52柱层析后得到镉-金属硫蛋白亚型。再用SephadexG-25脱盐。冷冻干燥后即为成品；(4)抗原的制备用戊二醛将镉-金属硫蛋白与牛血清蛋白相偶联，再用弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂乳化得可注射抗原；(5)抗体的诱导将处理好的抗原注射到家兔体内诱导抗体的合成，当抗体效价达到1∶16以上时心脏取血；(6)抗体的提纯先用饱和硫酸铵法对抗体进行粗提，在用DEAE-SephadexA50进行纯化；(7)酶联免疫吸附测定法的建立包被；封闭；加一抗与样品；加酶标二抗；加底物；加终止液；在酶标仪上450nm波长读数。
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