[发明专利]一种简单高效的青蒿遗传转化体系

摘要

本发明公开了一种简单高效的青蒿遗传转化体系，其构建方法包括如下步骤：1)青蒿植株的栽种；2)转化液的配制；3)转化菌的培养；4)植株遗传转化；5)转化植株筛选；6)T1代表型鉴定。本发明提供的一种简单高效的青蒿遗传转化体系可以提高转基因植株的得率。

主权项

一种简单高效的青蒿遗传转化体系，其构建方法包括步骤如下：1)青蒿植株的栽种；2)转化液的配制；3)转化菌的培养；4)植株遗传转化；5)转化植株筛选；所述青蒿植株的栽种包括：青蒿种子于先年11月中旬播种于黑壤土、蛭石、细沙的混合土中盆栽，其中黑壤土、蛭石、细沙重量比例为4∶2∶1，第二年2月，放于温室中，温度20～22℃，相对湿度60％～70％，光照16h，黑暗8h，培养约2个月后，放于室外，长至茎高100cm左右时，去其顶生花序，继续生长3～5d后，即可用于转化；所述转化液的配制：是按照要求配制转化液；所述转化菌的培养：从加有卡那霉素的农杆菌培养基上，挑取阳性农杆菌接种于含利福平和卡那霉素的YEB液体培养基中，28℃，220r/m振荡培养至OD600为1.2～1.8，离心弃上清，收集菌体重悬于转化液中；所述植株遗传转化包括：将准备好的植株倒置于含转化缓冲液的塑料桶中，套黑色塑料袋避光放置24h，然后按常规方法培育植株至结实，收获成熟种子；所述转化植株筛选：将得到T0代种子，经选择培养基筛选，得到阳性植株，提取阳性植株DNA，通过PCR技术对阳性植株进行进一步鉴定；