[发明专利]猪圆环病毒2型亚单位疫苗及其制备方法

摘要

本发明的主要目的在于提供一种PCV2亚单位疫苗及其制备方法，具体地说是，利用杆状病毒载体表达系统在昆虫细胞中大量表达重组ORF2蛋白，研制出具有良好免疫效果的亚单位疫苗。采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus ExpressionSystem)对猪圆环病毒2型的ORF2基因进行全基因扩增，并在5′端引入蜂毒素信号肽核苷酸序列，构建含有蜂毒素信号肽核苷酸序列和PCV2ORF2基因序列的开放阅读框的重组杆状病毒，感染昆虫细胞表达出具有高效良好PCV2抗原性的重组ORF2蛋白，制备成含有PCV2重组ORF2蛋白的亚单位疫苗。通过仔猪攻毒试验，验证该亚单位疫苗具有良好的免疫保护作用。

主权项

一种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1).克隆猪圆环病毒2型ORF2基因并引入信号肽基因序列，转入转移载体，获得包含猪圆环病毒2型重组ORF2基因的转移载体；(2).包含猪圆环病毒2型重组ORF2基因的转移载体转化入含有穿梭载体的大肠杆菌感受态细胞中，获得包含猪圆环病毒2型重组ORF2基因的穿梭载体，再将该穿梭载体转染入昆虫细胞中，获得重组杆状病毒；(3).重组杆状病毒感染昆虫细胞及昆虫细胞的培养；(4).由重组杆状病毒的猪圆环病毒2型重组ORF2基因表达猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白，收获和纯化猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白；(5).利用猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白，辅以佐剂，经乳化，制备猪圆环病毒2型亚单位疫苗。