[发明专利]运动发酵单胞菌的电穿孔遗传操作方法有效
| 申请号： | 201010241809.5 | 申请日： | 2010-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN102080097A | 公开（公告）日： | 2011-06-01 |
| 发明（设计）人： | 邹少兰;张鲲;洪解放;马媛媛;井欣;张敏华 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种运动发酵单胞菌的电穿孔遗传操作方法，包括下述步骤：将待转化DNA通过电穿孔转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中或用运动发酵单胞菌无细胞提取液与待转化DNA共同孵育，通过电穿孔将孵育后的DNA转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中；本发明利用运动发酵单胞菌菌株无细胞培养液处理待转化DNA，使其获得修饰，提高转化效率；利用本发明的方法优化了的关键电穿孔物理参数对不同的宿主和DNA进行电穿孔，提高了运动发酵单胞菌电穿孔遗传操作的转化效率及稳定性，适应了所有通过电穿孔转化进行的、不同构建目的的遗传操作，从而又具有通用性。 | ||
| 搜索关键词： | 运动 发酵 单胞菌 穿孔 遗传 操作方法 | ||
【主权项】：
一种运动发酵单胞菌的电穿孔遗传操作方法，其特征是包括下述步骤：将待转化DNA通过电穿孔转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中或用运动发酵单胞菌无细胞提取液与待转化DNA共同孵育，通过电穿孔将孵育后的DNA转化到运动发酵单胞菌的感受态细胞中；所述运动发酵单胞菌的感受态细胞是将运动发酵单胞菌培养至OD600nm＝0.375～0.420的菌液浓缩100倍而制成；电穿孔操作的参数为：2mm电击杯中感受态细胞体积为80μl～160μl；电场强度为11.0～14.0kV/cm；复苏时间为3h～24h。
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