[发明专利]猪基因组中外源基因整合位点的检测方法

摘要

猪基因组中外源基因整合位点的检测方法，本发明涉及外源基因整合位点的检测方法。本发明解决了现有外源基因整合位点的检测方法操作复杂，误差较大的问题。方法：一、分别针对TgInS1、TgInS2和TgInS3外源基因插入基因组中的位点进行PCR扩增；二、电泳检测，即实现了猪基因组中外源基因整合位点的检测。本发明的方法操作简单，且与现有的外源基因整合位点的检测方法相比较，人为误差小，检测结果准确。

主权项

猪基因组中外源基因整合位点的检测方法，其特征在于猪基因组中外源基因整合位点的检测方法按照以下步骤进行：一、提取转基因猪子代基因组DNA，分别针对TgInS1、TgInS2和TgInS3外源基因插入基因组中的位点进行PCR扩增，其中，针对TgInS1的引物为P‑TgInS1U上游引物：5'‑CTATTGCCTTGGCAGACTGACCTCT‑3'，P‑TgInS1D下游引物：5'‑ACAGATCAATGGAATAGAACAGAGGG‑3'，PCR扩增条件为：94℃预变性3min、94℃变性30s、55 ℃退火30s、72℃延伸1min、共30个循环、72℃延伸5min、4℃保温1h；PCR反应体系25 μl由 0.2 mM dNTP、 0.5 U Taq DNA 聚合酶、100 ng猪基因组DNA、1.25 μM的P‑TgInS1U上游引物、1.25 μM的P‑TgInS1D下游引物、1× PCR 缓冲液和余量的纯净水组成；针对TgInS2的引物为P‑TgInS2U上游引物：5'‑CTGTTCTGCCTAAACCGCATCACCATG‑3'，P‑TgInS2D下游引物：5'‑GCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTT‑3'，PCR扩增条件为：94℃预变性3min、94℃ 变性30s、55 ℃退火 30s、72℃延伸1min、共30个循环、72℃延伸 5min、4℃保温1h；PCR反应体系25 μl由0.2 mM dNTP、 0.5 U Taq DNA 聚合酶、100 ng猪基因组DNA、1.25 μM的P‑TgInS2U上游引物、1.25 μM的P‑TgInS2D下游引物、1× PCR 缓冲液和余量的纯净水组成；针对TgInS3的引物为P‑TgInS3U上游引物：5'‑CCCCGTGAGTCAAACCGCTATCCA‑3'，P‑TgInS3D下游引物：5'‑TGCATTCTGTCGATACGCCACGAGGAC‑3'，PCR扩增条件为：94℃预变性3min、94℃ 变性30s、55 ℃退火 30s、72℃延伸1min、共30个循环、72℃延伸 5min、4℃保温1h；PCR反应体系25 μl由0.2 mM dNTP、 0.5 U Taq DNA 聚合酶、100 ng猪基因组DNA、1.25 μM的P‑TgInS2U上游引物、1.25 μM的P‑TgInS3D下游引物、1× PCR 缓冲液和余量的纯净水组成；二、步骤一的PCR反应结果进行电泳检测，即实现了猪基因组中外源基因整合位点的检测。