[发明专利]以叶片为外植体的月季再生植株的方法

摘要

本发明属于植物组织与细胞培养技术领域，具体涉及以月季叶片为外植体经过体细胞胚发生途径的再生植株方法。本发明包括以下三个培养阶段：(1)在诱导培养基上培养月季外植体，该外植体分别为月季未展开的叶片，从外植体上直接诱导体细胞胚；(2)将体细胞胚接种到增殖培养基上增殖并促进其进一步分化；(3)将增殖培养后的体细胞胚接种到体细胞胚成苗培养基和生根培养基上再生成完整植株。本发明的方法具有外植体来源广泛，取材方便等优点。所得到的体细胞胚是农杆菌介导的遗传转化的良好受体，可用于月季遗传转化的研究。本发明还涉及用于该方法的培养基组成。

主权项

一种月季再生为完整植株的方法，它包括下列步骤：①以月季未成熟叶片为外植体，将所述的外植体在诱导培养基中直接诱导出体细胞胚；②将步骤①中的体细胞胚接种到体细胞胚增殖培养基中增殖并使其进一步分化，得到成熟体细胞胚；③将步骤②得到的成熟体细胞胚接种到体细胞胚成苗培养基中使其再生出植株；④将步骤③得到的植株接种到生根培养基中进行生根培养得到完整植株；其中所述的诱导培养基的组成如下：MS基本培养基，2，4‑二氯苯氧乙酸3‑4mg/L，葡萄糖30g/L，植物凝胶2.5g/L；所述的体细胞胚增殖培养基的组成如下：MS基本培养基，2，4‑二氯苯氧乙酸0‑1.0mg/L，6‑苄基腺嘌呤0‑0.05mg/L，葡萄糖60g/L，植物凝胶2.5g/L；所述的体细胞胚成苗培养基的组成如下：MS基本培养基，唑重氮苯茎脲0‑2.0mg/L，6‑苄基腺嘌呤0.5‑1.0mg/L，葡萄糖30g/L，植物凝胶2.5g/L；所述的生根培养基的组成如下：MS基本培养基，萘乙酸0.01mg/L，蔗糖30.0g/L，琼脂粉7.5mg/L。