[发明专利]家蚕血液型脓病病源BmNPV直接PCR检测法无效
| 申请号： | 201010258127.5 | 申请日： | 2010-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN101886142A | 公开（公告）日： | 2010-11-17 |
| 发明（设计）人： | 杨金宏;孔卫青;王代钢 | 申请（专利权）人： | 安康学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 西安西达专利代理有限责任公司 61202 | 代理人： | 谢钢 |
| 地址： | 725000 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种家蚕血液型脓病病源BmNPV直接PCR检测法，其检测方法首先对染病家蚕的血液通过乙醇沉淀法进行处理，去除PCR反应抑制物；根据家蚕血液型脓病病源BmNPV的基因组分析，设计多角体蛋白基因PCR引物；对多角体蛋白基因进行PCR扩增，反应体系中加入了抗PCR反应抑制物BSA，同时以家蚕线粒体COI基因的引物进行PCR反应做阳性对照；分别取正常家蚕血液和感染了白僵病、绿僵病、细菌病、微孢子病的家蚕的染病中肠，进行PCR反应的特异性分析；琼脂糖胶电泳检测上述PCR反应结果。整个检测过程操作简单，仅4个小时就可完成。应用本发明定期抽样检测，可以在BmNPV感染早期对疾病进行诊断，及时采取措施预防疾病的发生。 | ||
| 搜索关键词： | 家蚕 血液 型脓病 病源 bmnpv 直接 pcr 检测 | ||
【主权项】：
家蚕血液型脓病病源BmNPV直接PCR检测法，其特征在于检测步骤如下：（1）对染病家蚕的血液通过乙醇沉淀法进行处理，去除PCR反应抑制物；（2）根据家蚕血液型脓病病源BmNPV的基因组分析，设计多角体蛋白基因 (polyhedron, polh) PCR引物，引物序列为：polhf：ATGCCGAATTATTCATACACCCC polhr：TAATACGCCGGACCAGTGAACAG（3）对多角体蛋白基因进行PCR扩增，反应体系中加入了抗PCR反应抑制物BSA，同时以家蚕线粒体COI基因的引物进行PCR反应做阳性对照；（4）分别取正常家蚕血液和感染了白僵病、绿僵病、细菌病、微孢子病的家蚕的染病中肠，进行PCR反应的特异性分析；（5）琼脂糖胶电泳检测上述PCR反应结果。
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