[发明专利]一种以甜高粱幼穗或幼穗诱导愈伤组织为外植体遗传转化方法

摘要

本发明为“一种以甜高粱幼穗或幼穗诱导愈伤组织为外植体遗传转化方法”，属植物基因工程技术领域。本发明以甜高粱幼穗或是幼穗诱导产生的愈伤组织为转化受体，采用直接转化法转化外源基因，轰击后的幼穗或是幼穗愈伤组织经过恢复培养，再筛选培养，得到抗性愈伤，再将其继代分化培养、出芽、生根，移栽得到再生转化植株。本发明利用所建立的遗传转化体系转化甜高粱植物获得转基因抗虫植株。本发明为利用生物技术改良甜高粱的品质和提高抗逆性等研究提供了技术支撑，也为加快甜高粱的基础研究打下了很好的基础。

主权项

一种以甜高粱幼穗或幼穗诱导愈伤组织为外植体遗传转化方法，包括如下顺序步骤：1)选取甜高粱旗叶期长约2‑5cm幼穗，切成薄片，将其接种于诱导培养基中培养，所述诱导培养基为：MS基础培养基+2，4‑D 2mg/L+ZT 2.0mg/L+PVP 10mg/L+抗坏血酸10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+30g/L蔗糖+7.2g/L琼脂，pH 5.8；形成愈伤组织；2)选取生长状态良好的幼穗或幼穗愈伤组织块接种于高渗培养基中培养，所述高渗培养基为：MS基础培养基+2，4‑D 2mg/L+ZT 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+PVP 10mg/L+抗坏血酸10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+30g/L蔗糖+7.2g/L琼脂+0.4M甘露醇，pH 5.8；3)直接转化法转入外源基因，继续在高渗培养基中培养过夜；4)转入继代培养基中恢复培养，所述继代培养基为：MS基础培养基+2，4‑D 2mg/L+ZT 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+PVP 10mg/L+抗坏血酸10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+30g/L蔗糖+7.2g/L琼脂，pH 5.8；5)再转入筛选培养基上筛选，所述筛选培养基为：MS继代培养基+加适宜的筛选剂，pH 5.8；6)将获得的抗性愈伤转接于分化培养基中培养至出苗，所述分化培养基为：MS基础培养基+ZT 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+PVP 8‑10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH 5.8；7)将苗移入生根培养基中培养出根，所述生根培养基为：1/2MS基础培养基+肌醇500mg/L+NAA 400mg/L+IBA 2mg/L+PVP 8‑10mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH 5.8；8)移栽至温室花盆或大田。