[发明专利]一种表达鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的重组杆状病毒及其应用

摘要

本发明涉及一种表达鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的重组杆状病毒及其应用，属于生物技术领域。所述重组杆状病毒，由以下方法制备：获得S基因，构建及鉴定重组转移载体pFastBacI-S，构建及鉴定重组穿梭载体AcIBV-SBacmid，重组穿梭载体感染Sf9昆虫细胞，获得表达鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的重组杆状病毒vAcIBV-S。本发明还提供所述重组杆状病毒在检测鸡传染性支气管炎病毒抗体方面的应用。该重组杆状病毒，能够用于检测鸡传染性支气管炎病毒抗体，避免了活病毒作为抗原易散毒的危险。采用该重组杆状病毒检测鸡传染性支气管炎病毒抗体，可用于大批量检疫，特别适合基层检疫部门使用。

主权项

一种表达鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的重组杆状病毒，由以下方法制备：(1)获得S基因：从感染病毒DS10的鸡胚的尿囊液中提取RNA，以该RNA为模板，采用下游引物SR进行反转录，获得cDNA；以该cDNA为模板，采用上游引物SF、下游引物SR进行PCR反应，获得鸡传染性支气管炎病毒S基因；所述上游引物SF为5’‑CGGGATCCATGTTGGGGAAGTCACTGTTTTT‑3’所述下游引物SR为5’‑CCGTCGACTTA AACAGACTTTTTCGGTCTGTATTG‑3’；(2)构建及鉴定重组转移载体pFastBacI‑S：将所述S基因插入pFastBacI载体，然后转化入DH5α感受态细胞，采用抗生素平板筛选获得重组子，将该重组子进行酶切，然后电泳，鉴定为阳性的重组子所含有的重组质粒即为重组转移载体pFastBacI‑S(如图2所示)；(3)构建及鉴定重组穿梭载体AcIBV‑S Bacmid：将重组转移载体pFastBacI‑S转化进含穿梭质粒Bacmid的DH10Bac细胞，经蓝白斑筛选获得含有重组S Bacmid 的DH10Bac细胞；提取所述重组S Bacmid的DNA，采用M13上游引物和下游引物进行PCR，电泳后鉴定为阳性的，则该重组S Bacmid为重组穿梭载体AcIBV‑SBacmind；所述M13上游引物为5’‑GTTTTCCCAGTCACGAC‑3’所述M13下游引物为5’‑CAGGAAACAGCTATGAC‑3’(4)重组穿梭载体AcIBV‑S Bacmid感染Sf9昆虫细胞，获得表达鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的重组杆状病毒vAcIBV‑S。