[发明专利]一种评价嗜酸乳杆菌免疫调节作用的方法

摘要

一种评价嗜酸乳杆菌免疫调节作用的方法，涉及一种评价免疫调节作用的方法。方法：一、将待评价的嗜酸乳杆菌培养到对数生长后期，制得菌悬液；二、将极化状态的人结肠腺癌细胞Caco-2与菌悬液共同孵育；三、采用Trizol法抽提孵育后的人结肠腺癌细胞Caco-2的总RNA，再提取蛋白质；四、利用Real Time RT-PCR法和Western blot法对免疫调节相关基因的表达情况分别在总RNA和蛋白质水平进行检测和比对即可。本发明通过对免疫调节相关基因的检测，可以更加客观的评价嗜酸乳杆菌对宿主可能产生的不良炎症反应等，以排除其潜在的致病危险。

主权项

1.一种评价嗜酸乳杆菌免疫调节作用的方法，其特征在于评价嗜酸乳杆菌免疫调节作用的方法按以下步骤实现：一、将待评价的嗜酸乳杆菌培养到对数生长后期，离心后弃去上清，用冷的PBS洗3次，然后用DMEM细胞培养液重悬菌体，得菌浓度为3×10⁸cfu/ml的菌悬液；二、将极化状态的人结肠腺癌细胞Caco-2用PBS洗2次，然后加入1ml的菌悬液作为实验组，加入1ml的DMEM细胞培养液作为空白对照组，在37℃、5％CO₂的培养箱里共同孵育2h；三、采用Trizol法抽提实验组和空白对照组孵育后的人结肠腺癌细胞Caco-2的总RNA，再提取蛋白质；四、利用Real Time RT-PCR法和Western blot法对免疫调节相关基因的表达情况分别在总RNA和蛋白质水平进行检测，检测结果通过与表1和表2中各免疫调节相关基因的表达上调或表达下调情况及生物学功能进行比对，即可评价嗜酸乳杆菌是否具有免疫调节作用；表1表2其中步骤四中评价嗜酸乳杆菌是否具有免疫调节作用的标准：若总RNA和蛋白质水平检测结果与表1中各免疫调节相关基因的表达上调或表达下调情况全部吻合，则待评价的嗜酸乳杆菌具有免疫调节作用；若总RNA和蛋白质检测结果与表1中免疫调节相关基因的表达上调或表达下调情况只有部分符合的话，则对不符合的基因参照表2中免疫调节相关基因的生物学功能来评价是否会产生不良的生物学效应，若不产生不良的生物学效应，则待评价的嗜酸乳杆菌仍具有免疫调节作用；若产生不良的生物学效应，则待评价的嗜酸乳杆菌不具有免疫调节作用。