[发明专利]甜(辣)椒未成熟小孢子直接诱导萌发成植株的方法

摘要

本发明甜(辣)椒未成熟小孢子直接诱导萌发成植株的方法，属于植物细胞工程技术领域，该方法包括以下步骤：(1)从小孢子处于单核靠边期或双核期的无菌花蕾中获得无菌花药；(2)无菌花药在改良的R培养基中，4℃低温处理2～15天的预培养；(3)在改良的液体R培养基中收集小孢子；(4)小孢子在改良的液体R培养基中，24～28℃，黑暗或光照下诱导培养；(5)植株的获得。发明所用的游离小孢子培养方法对于不同类型的多个品种的甜(辣)椒的小孢子培养中均获得了成功，该方法可用于不同基因型的多种甜(辣)椒的未成熟小孢子培养。

主权项

甜(辣)椒未成熟小孢子直接诱导萌发成植株的方法，包括下述步骤：(1)、无菌花药的获得：对小孢子处于单核靠边期或双核期的花蕾进行表面消毒，剥离花药；(2)、无菌花药的预培养：将步骤(1)中的无菌花药置于改良的固体R培养基中，4℃低温处理2～15天；(3)、小孢子的收集：取步骤(2)中预培养后的花药，置于改良的液体R培养基中，挤压使小孢子游离，300目滤网过滤，离心收集小孢子；(4)、小孢子的诱导培养：将步骤(3)获得的小孢子置于含麦芽糖或蔗糖3～15％、2，4‑D浓度为0.1～0.5mg/L，KT浓度为0.5～1mg/L的液体R培养基中，在24～28℃下，黑暗或光照培养；(5)、植株的获得：当步骤(4)中的小孢子经诱导形成胚状体后，分别按照下述(i)、(ii)、(iii)三种不同路径进行培养，得到正常植株；(i)小孢子经诱导后形成的胚状体为子叶型胚时，转至含有浓度为1～3％蔗糖的1/2MS培养基中培养，得到正常植株；(ii)小孢子经诱导后形成的胚状体为畸形胚状体时，可用改良液体R培养基与它的固体形式1∶1混合包埋胚状结构，进行培养，得到正常植株，所述的畸形胚状体为畸形心型胚或畸形鱼雷型胚；(iii)小孢子经诱导后形成不正常的小植株时，将植株转接至含有浓度为1％‑3％的蔗糖，BA 2毫克/毫升和NAA 0.2毫克/毫升的MS固体培养基中培养，得到正常植株，所述的不正常的小植株为没有完整的生长点或是生长畸形的再生植株。