[发明专利]利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法

摘要

本发明公开了一种利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法，该方法以山羊基因组DNA序列为模板，在TaqDNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用对引物P1在PCR条件下进行扩增Kisspeptin基因内含子2，根据琼脂糖凝胶电泳对其进行目的片段大小判定；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1的PCR扩增产物，发现引物P1扩增位点存在1个碱基的突变和8bp的碱基缺失，然后对引物P1的扩增产物进行基因分型和基因频率分析，以及与关中奶山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析；结果表明：Kisspeptin基因内含子2由引物P1检测的SNPs位点可用作山羊产羔数性状选择的分子标记。

主权项

一种利用神经内分泌因子基因选择山羊产羔性状的分子标记方法，其特征在于，包括下列步骤：1）以山羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物P1在PCR条件下进行扩增，筛查山羊Kisspeptin基因内含子2的碱基突变；所述的引物P1如下：上游引物1F：5′ CAGACCGCATTTCCACCTAT 3′；下游引物1R：5' TTCATCAGGCTCCTACTAGACC 3'；所述的PCR扩增的条件是：12μL反应体系，包括0.25U Taq DNA聚合酶，6 μL 2×Buffer，0.4 μL 山羊基因组DNA样品，10 pmol/μL引物P1的上、下游引物各0.3μL和灭菌超纯水4.9 μL；所述的PCR扩增反应程序如下：利用引物P1的PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性30s，62.8℃退火40s，72℃延伸40s，共进行35个循环，最后72℃充分延伸10min，4℃保存；2）根据琼脂糖凝胶电泳对引物P1的PCR扩增产物进行大小判定，发现引物P1扩增位点存在1个碱基的突变和8bp的碱基缺失；3）采用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1扩增的PCR扩增产物，然后对引物P1的PCR扩增产物进行基因分型和基因频率分析，以及与关中奶山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析，结果如下：纯合型TT在2643bp位的碱基是T，杂合型TC在2643bp位的碱基是T\C，杂合型CC在2643bp位的碱基是T；杂合型TG在2677bp位缺失AGTTCCCC。