[发明专利]应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法

摘要

本发明提供一种应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，包括如下步骤：(1)将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液、接种Vero细胞进行培养，待微载体上的细胞形成致密的单层，接种狂犬病毒，并继续培养，使病毒繁殖；(2)接毒后18h，连续收获病毒液；(3)对收获的病毒液进行超滤浓缩和病毒灭活；(4)通过柱层析方法纯化灭活病毒制备疫苗。本发明采用生物反应器微载体培养技术进行细胞的高密度培养，生产动物狂犬病疫苗，与传统的转瓶生产方法相比，自动化控制程度高，生产可实时监控；节省人力，降低成本；生产用地少，规模易于扩大；生产的病毒滴度高，批间差异小，产品质量稳定，副反应小。

主权项

应用生物反应器工业化生产动物狂犬病疫苗的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，接种Vero细胞进行培养，待微载体上的细胞形成致密的单层，接种狂犬病病毒，并继续培养；(2)接毒后18h，连续收获病毒液；(3)将上述收获的用30万截留分子量的超滤膜包浓缩10～50倍，按灭活剂与浓缩病毒液的体积比为1∶2000加入质量浓度为37％甲醛溶液进行灭活后，再经过凝胶层析柱Sepharose 4FF柱层析得到纯化病毒液；(4)将纯化病毒液按病毒液和稳定剂7∶1体积比加入稳定剂配制成成品疫苗，所述的稳定剂为：将蔗糖40g、胰蛋白胨8g、甘露醇32g加入双蒸馏水中，并加双蒸馏水至100ml。