[发明专利]一种基于荧光淬灭解除的DNA点突变检测方法

摘要

本发明涉及一种基于荧光淬灭解除的DNA点突变检测方法，步骤如下：步骤1，提取待测样品的总基因组DNA；步骤2，确定待测基于的已知点突变位点，分析所要检测点突变的序列，并设计、合成标记有淬灭荧光基团的正向和反向引物；步骤3，用所述正向和反向引物对待测DNA样品进行PCR扩增，并以已知正常的DNA样品作为对照；步骤4，检测荧光基团发射波长的荧光。本发明采用具有3’~5’DNA外切活性的高保真DNA聚合酶进行PCR反应，在检测基因的点突变方面更加可靠和稳定。在多种肿瘤疾病的早期检测、个性化治疗、病情判断和复发监控等方面有着重要的现实意义。

主权项

一种基于荧光淬灭解除的DNA点突变检测方法，其特征在于，步骤如下：步骤1，提取待测样品的总基因组DNA；步骤2，确定待测基因点突变位点，在所述位点的上游和下游区域分别选择一段序列设计正向和反向PCR引物，使其中一侧引物3’端的最后一个碱基正好在要检测的点突变的位置，并使这一碱基与这一位置的正常序列一致或相匹配；在所述引物3’端上标记淬灭荧光基团，在靠近所述引物3’端的碱基上标记报告荧光基团；步骤3，加入具有3’~5’DNA外切酶活性的高保真DNA聚合酶，用所述正向和反向引物对待测DNA样品进行PCR扩增；并以已知正常的DNA样品作为对照；步骤4，检测报告荧光基团发射波长的荧光；若检测到所述报告荧光基团的发射波长的荧光，则所述待测DNA中存在点突变；若检测不到所述报告荧光基团的发射波长的荧光，则所述待测DNA中不存在点突变。