[发明专利]多拷贝高效表达重组菌丝霉素的毕赤酵母

摘要

本发明公开了一种多拷贝表达重组菌丝霉素的毕赤酵母的制备方法。该方法包括：根据毕赤酵母翻译的密码子偏爱性，设计出菌丝霉素表达基因的序列；将优化的菌丝霉素基因融合在表达载体pPICZαA的α-因子信号肽C端，构建单拷贝表达载体，该载体含有由起始信号元件醇氧脱氢酶强启动子(AOX)、α-因子信号肽基因及融合在其C端的菌丝霉素基因和终止信号元件AOX(TT)等组成的菌丝霉素表达盒；利用限制性内切酶BglII和BamHI粘性末端能互补的原则，通过反复酶切、连接和转化操作，获得含菌丝霉素基因的不同拷贝串联表达盒的重组质粒，电转化毕赤酵母后，在甲醇诱导下能高效分泌表达菌丝霉素，表达量与菌丝霉素基因拷贝数之间存在线性关系。本发明所构建的多拷贝高表达酵母细胞可用于提高产量、降低成本，适于菌丝霉素的规模化生产。

主权项

一种表达菌丝霉素的酵母细胞，其特征在于，所述酵母细胞的染色体中整合有表达菌丝霉素的构建物，所述构建物含有2‑16个串联排列的菌丝霉素表达盒，每个所述菌丝霉素表达盒包括以下元件：(a)起始信号元件为醇氧脱氢酶强启动子(AOX)；(b)α‑因子信号肽基因及融合在其C端的菌丝霉素基因；(c)终止信号元件为AOX(TT)。所述酵母细胞在甲醇诱导下表达菌丝霉素，表达量与菌丝霉素基因拷贝数之间存在线性关系。