[发明专利]一种卵黄稀释液的配制新方法

摘要

一种卵黄稀释液的配制新方法，属于动物生殖生物领域，它包括：卵黄的制备；配制4.6倍Tris-A母液及6倍Tris-B母液，无菌过滤；用无菌水稀释为0.5倍Tris-A和Tris-B溶液；分别和卵黄混合、搅拌、静置、离心后收取上清液；用4.6倍Tris-A和6倍Tris-B母液分别调节上清液的浓度，使Tris-A和Tris-B达到1倍；分别加入抗生素及无菌甘油，调pH值，于4℃保存备用。本发明省去过滤，方法简单，卵黄稀释液颗粒少，保证冷冻精子的活率，提高冻精产品质量，减少生产成本。

主权项

一种卵黄稀释液的配制新方法，其特征在于：它包括下述步骤：1)卵黄的制备：选取新鲜鸡蛋，将蛋壳用75％的酒精消毒，在无菌条件下去蛋壳、蛋清；用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干，用无菌注射器抽取卵黄；2)4.6倍Tris‑A及6倍Tris‑B母液的配制：100ml 4.6×Tris‑A    母液配方药品名称             重量(g)Tris base            16.25柠檬酸               7.92D‑Fructose           5.82100ml 6×Tris‑B      母液配方药品名称             重量(g)Tris base            21.45柠檬酸               11.99D‑Fructose           8.83按照上述配方用双蒸水配制4.6倍Tris‑A母液，6倍Tris‑B母液，分别调PH值为6.80±0.02，用0.22μm无菌滤器过滤；3)0.5倍Tris‑A溶液和0.5倍Tris‑B溶液的配制：用无菌水将4.6倍Tris‑A母液与6倍Tris‑B母液分别稀释为0.5倍Tris‑A溶液和0.5倍Tris‑B溶液，配制好的溶液在4℃环境下保存，备用；4)Tris‑A、Tris‑B稀释液的配制①Tris‑A稀释液的配制将0.5倍Tris‑A溶液和卵黄按7∶2的体积比加到一无菌容器中，于4℃环境下用磁力搅拌器以400‑500转/分钟搅拌2小时，再静置20h，然后将上清液4℃、3850g离心60min，取上清液，并按1∶9.4的体积比加入4.6倍Tris‑A母液，摇匀，加入抗生素：庆大霉素终浓度500μg/ml；林可霉素终浓度300μg/ml；奇霉素终浓度600μg/ml；泰乐菌素终浓度100μg/ml，调PH值为6.80±0.02，于4℃冰箱中保存备用；②Tris‑B稀释液的配制将0.5倍Tris‑B溶液和卵黄按7∶2.3的体积比加到一无菌容器中，于4℃环境下用磁力搅拌器以400‑500转/分钟搅拌2小时，再静置20h，然后将上清液4℃、3850g离心60min，取上清液，并按7∶93的体积比加入6倍Tris‑B母液，再加入无菌甘油，甘油最终比例为12％(v/v)，摇匀，加入抗生素：庆大霉素终浓度26.6μg/ml；林可霉素终浓度15.9μg/ml；奇霉素终浓度31.9μg/ml；泰乐菌素终浓度5.3μg/ml，调PH值为6.80±0.02，于4℃冰箱中保存备用。