[发明专利]一种快速简便分析传统酿造用大曲微生物群落结构的方法

摘要

本发明涉及一种用于分析传统酿造用大曲微生物群落结构的免培生物化学方法，即使用磷脂脂肪酸谱图分析技术分析传统酿造用大曲微生物群落结构。具体步骤如下：1)称取一定量粉碎混匀后的大曲样品；2)加入缓冲液和有机试剂，得到含有脂质的有机相；3)有机相经硅胶小柱分离，洗脱收集含极性脂质有机组分；4)温和甲酯化，加入提取试剂得到相应脂肪酸甲酯；5)使用气相色谱-质谱联用仪进行脂肪酸甲脂的定量分析；6)根据不同磷脂脂肪酸组成特点，确定样品中微生物群落结构特征。本发明对研究酿造用大曲微生物群落结构组成；了解制曲过程不同微生物群落消长规律，提供了准确、快速的免培检测手段。

主权项

一种快速简便分析传统酿造用大曲微生物群落结构的方法，包括以下步骤：a)采集用于实验的大曲样品，粉碎混匀；b)称量一定量a)中的大曲样品，依次加入3.2ml磷酸盐缓冲液、8ml甲醇、4ml氯仿，振荡静置过夜，收集含有脂质的有机相；c)将步骤b)中获得的有机相经硅胶小柱分离，分别用10ml氯仿、10ml丙酮和10ml甲醇洗脱，收集含有极性脂的甲醇相洗脱液；d)将步骤c)得到的洗脱液经氮气吹干后加入1ml甲苯∶甲醇((1∶1)v/v)和1ml 0.2mol·l‑1氢氧化钾‑甲醇，甲脂化环境为37℃水浴15min；e)将步骤d)得到脂肪酸甲酯混合液，通过4ml正己烷萃取；f)将步骤e)得到的脂肪酸甲酯萃取液经氮气吹干，加入含有正十九酸甲酯内标物质的溶剂溶解；g)将步骤f)得到的溶液进行气相色谱‑质谱联用仪的分析测定，得到样品中相关磷脂脂肪酸的分布及含量，气相色谱‑质谱联用仪采用的是Thermo Trace GC Ultra DSQ II气质联用仪，检测中使用的升温程序如下：进样口温度：250℃；进样量：0.5μl；分流比：10∶1；载气(He)流速：1ml·min‑1；起始柱温：50℃，保持2min；以5℃·min‑1升至220℃，保持15min；质谱条件：电子强度：70eV；离子源温度：200℃；扫描范围：35～400amu；h)结合相关的数据处理方法，处理步骤g)得到的数据，确定样品微生物群落特征。