[发明专利]一种综合利用猪血的方法

摘要

本发明属生物活性物质的分离提取技术领域。具体涉及将新鲜猪血经抗凝处理后以血浆和血球为出发底物分别制备凝血酶和猪血水解蛋白的方法。血浆经低温冷冻、沉淀收集凝血酶原、离子激活、酶液纯化等步骤制得高活性的凝血酶；血球经破壁、溶血、复合酶分段酶解、过滤除菌等步骤制得高活性的猪血水解蛋白。该方法制得的猪血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白质的80％以上，易于吸收利用。本发明方法充分利用了原料，一次投料可以生产两种高附加值产品。整个生产过程避免使用毒性大的有机溶剂，克服了产品单一、溶剂残留等缺陷，降低了生产成本。用本发明方法，1L猪血可制得凝血酶精品6000U以上、高活性的猪血水解蛋白粉150g以上。

主权项

一种综合利用猪血的方法，该方法组成步骤如下：1)抗凝猪血的制备：取检疫合格的新鲜猪血放入容器1中，该容器中已事先加入了0.5％‑5％(w/v)溶于少量去离子水中的抗凝剂柠檬酸三钠，充分搅拌均匀，低温静置备用；2)血浆、血球分离：低温静置后，抗凝猪血上层为无色透明液体为血浆，下层深红色粘稠液体为血球，用虹吸法将上层血浆吸到容器2中；余下的血球经转速为3000‑3500r/min离心后，将上层血浆合并到容器2中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至容器3中过夜待用；3)血浆沉淀收集凝血酶原：容器2中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用2‑8倍生理盐水稀释后再用2mol/L醋酸调pH至5.1‑5.2，低温静置过夜，收集沉淀即得凝血酶原；4)凝血粗酶液制备：将收集的凝血酶原沉淀溶解于生理盐水中，加热保温至37℃用1.0％CaCl2溶液，低速搅拌(500‑800r/min)20‑30分钟，激活凝血酶原，过滤收集滤液即得凝血酶粗酶液。5)凝血酶精品制备：向凝血酶粗酶液中加入8‑10倍冷生理盐水，用截留相对分子量(Mr)为60000的超滤膜处理，浓缩至原体积的1/20‑1/25后收集截留液，该液体即为精制凝血酶液，也可将截留液冷冻干燥，即得粉状凝血酶精品；6)血球破壁、溶血：向容器3中加入血球体积的适量生理盐水(使液体中蛋白质含量为8％‑10％)，升温至10℃左右，高速搅拌(1000r/min以上)20‑30分钟；7)血球蛋白分段酶解：用4.0mol/L NaOH调节pH至7.5，将温度升至37‑40℃，加入适量复合蛋白酶I，保温2小时后，再升温至55‑60℃，保温3小时；调节pH至9.0，加入适量复合蛋白酶II，保温4小时使血球蛋白充分水解；8)猪血水解蛋白制备：酶解结束后，冷却至常温，用0.22um的滤膜过滤除菌即可制成液体猪血水解蛋白，也可将该液体喷雾干燥后制成猪血水解蛋白粉。