[发明专利]一种从发酵液中提纯雷帕霉素的方法

摘要

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种从发酵液中提纯雷帕霉素的方法。为了提高雷帕霉素的纯度，降低雷帕霉素中的杂质含量，同时提高雷帕霉素的收率，本发明运用菌丝体抽提、发酵液萃取、大孔树脂吸附、硅胶柱层析及冷却结晶和重结晶技术从发酵液中提取纯化得到雷帕霉素纯品，纯度大于99.3％，单杂小于0.10％，收率提高到53～60％。本发明提高雷帕霉素纯度、降低杂质含量的同时提高了收率，而且操作方便、工艺简单，在工业化大生产中有很高的实用价值。

主权项

一种从发酵液中提纯雷帕霉素的方法，其特征在于它包含如下步骤：a.用丙酮或乙醇抽提发酵液过滤后得到的菌丝体，得到抽提液后，真空浓缩得浓缩抽提液；b.用乙酸乙酯萃取发酵液过滤后得到的上清液，控制发酵上清液的温度为15℃～35℃和pH为5.0～7.0，分离乙酸乙酯相得萃取液，真空浓缩得浓缩萃取液；c.将步骤a中的浓缩抽提液和步骤b中的浓缩萃取液合并得浓缩液，并加入到装有大孔树脂的床层进行吸附，用丙酮和水的混合溶液作为洗涤剂洗涤大孔树脂，控制洗涤剂的温度为15～35℃和pH为5.0～8.0，用丙酮和水的混合溶液作为洗脱剂洗脱大孔树脂，控制洗脱剂的温度为15～35℃和pH为5.0～8.0，收集洗脱液并真空浓缩，得浓缩洗脱液；d.用乙酸乙酯萃取c得到的浓缩洗脱液，经无水硫酸钠或无水硫酸镁脱水后真空浓缩得浓缩液，上样硅胶柱进行层析分离，正庚烷和丙酮混合溶液作为洗涤剂洗涤硅胶柱，正庚烷和丙酮混合溶液作为洗脱剂洗脱硅胶柱，收集洗脱液并真空浓缩得浓缩液；e.将步骤d得到的浓缩液溶于石油醚或乙醚中结晶，结晶过程控制温度为5～25℃、时间为1～24小时，干燥得到雷帕霉素粗品。f.丙酮溶解雷帕霉素粗品，真空浓缩后用乙醚重结晶，结晶过程控制温度为5～10℃、时间为10～20小时，干燥得到雷帕霉素纯品。