[发明专利]一种分离植物或微生物总RNA的试剂组合物及其制备方法

摘要

本发明属于分子生物学方法领域，涉及一种分离植物或微生物总RNA的试剂组合物及制备方法。以异硫氰酸胍、苯酚为主要成分，以NaCl、MgCl2等提供阳离子，以醋酸钠-醋酸缓冲系统稳定溶液pH，经氯仿简单抽提后，即可得高质量的RNA。由于本发明的RNA提取试剂中添加了糖原作为核酸沉淀剂，与同类试剂相比，核酸的沉降效率大为提高，对组织样品中含量很低的核酸成分亦能有效分离。使核酸沉降过程短时间内即可完成，免除了-20℃沉降数小时的过程，大大缩短了操作时间。该方法快捷、高效，适用样品广泛，比商业化TRIzol试剂更为廉价。克服了传统方法样品选择性强、操作繁琐、效率较低等缺点。且操作更为灵活，样品匀浆后可于-20℃保存3天再进行RNA的提取。

主权项

一种分离柑橘类植物、烟叶或梨腐烂病菌丝体总RNA纯化试剂组合物，其特征在于，包括以下组分：1)溶液A：a.按重量/体积计异硫氰酸胍50％；b.醋酸钠0.1mol/L；c.氯化钠0.25mol/L；d.氯化镁10mmol/L；e.按重量/体积计十二烷基肌氨酸钠0.7％；f.糖原60μg/ml；g.按体积/体积计β‑巯基乙醇0.5％2)溶液B：pH4.0‑5.0的水饱和酚；3)裂解液：a.按体积/体积计，溶液A 50％‑55％；b.按体积/体积计，溶液B 50％‑45％；c.按重量/体积比甲基红0.2‰；将溶液A和溶液B按体积比1∶1混合后，加入甲基红使溶液呈玫瑰红色，即为所述的裂解液。