[发明专利]液相色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法

摘要

本发明涉及医药中间体的分析技术，色谱分析N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸纯度的方法。现有技术没有N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品纯度的分析方法，无法对其纯度和质量进行分析和监控；造成使用该原料合成的叶酸质量无法保证，医疗效果无法保证。本发明采用常见的C18柱，配紫外检测器，以H3PO4-KH2PO4缓冲溶液-甲醇体系作为流动相，流动相流速设定为0.3mL/min；采用对氨基苯磺酸作为内标物，以内标标准曲线法对N-对氨基苯甲酰-L-谷氨酸样品的纯度进行分析。本发明的优点：分析条件容易实现；样品稳定性强，分析结果重现性好；分析结果准确度高。

主权项

一种液相色谱分析N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸纯度的方法，步骤如下：(1)设定操作条件：I.取H3PO4‑KH2PO4缓冲溶液‑甲醇体系作为流动相，缓冲溶液/甲醇体积此V缓冲溶液/V甲醇＝75/25‑85/15；II.调节缓冲溶液pH：滴加浓磷酸至50mmol/L的KH2PO4水溶液中，调节pH＝3.4‑4.4；III.流动相流速为0.2‑0.5mL/min；IV.紫外检测器检测波长：200‑310nm；V.色谱柱：Agilent‑Hypersil ODS 100×4.6mm，5um；VI.Waters 515液相色谱仪，配Waters 2487紫外检测器；VII.进样量：1‑20ML；(2)配制溶液：I.配制内标液：准确称取无水对氨基苯磺酸50mg，置于容量瓶中，以流动相溶解并定容至刻度；II.配制标样与样品溶液：i.N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标准储备液：准确称取N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标样50mg，置于容量瓶中，以流动相溶解并定容至刻度；ii.N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标准溶液：分别移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标准储备液，并以流动相定容至10mL；配制成浓度分别为0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/mL的标准溶液；分别准确移取2.5、3.5、4.5mL的N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标准储备液，并以流动相定容至10mL，配制成浓度分别为0.25、0.35、0.45mg/mL的标准溶液；iii.N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸样品储备液：准确称取N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸样品50mg，置于50mL容量瓶中，以流动相溶解，并定容至刻度；iv.N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸样品溶液：准确移取3.0mL的N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸样品储备液，并以流动相定容至10mL；III.加内标物的混合液的配制：移取步骤(2)I 配制的内标液0.5mL，加入0.5mL的步骤(2)II 配制的各浓度的N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标准溶液或样品溶液，配制成添加内标物的混合溶液；(3)分析方法考察：I.线性关系考察：以内标物与N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸标样的峰面积此Y＝Ai/As对标样的质量浓度Ci作图，绘制标准工作曲线，或者进行回归分析，拟合出线性方程式；II.精密度与回收率试验：以标准加入法进行回收率试验，重复进样3‑6次，测定结果的精密度；(4)N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸样品测定：取步骤(2)II.iv配制的N‑对氨基苯甲酰‑L‑谷氨酸样品溶液注入液相色谱仪中，以步骤(3)所述的内标标准曲线法进行定量测定。