[发明专利]纯化丙酮酸激酶的方法有效
| 申请号： | 201010532789.7 | 申请日： | 2010-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN102010854A | 公开（公告）日： | 2011-04-13 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 北京利德曼生化股份有限公司研发中心 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京银龙知识产权代理有限公司 11243 | 代理人： | 钟晶 |
| 地址： | 100176 北京市北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种纯化诊断用丙酮酸激酶的方法，其包括如下步骤：(1)将发酵液调节pH、匀浆，(2)稳定化处理，(3)热冷处理，(4)加酸碱处理，(5)用PEG(聚乙二醇)沉淀法将酶从含有杂离子的酶中沉淀出来，将沉淀重悬，继续用PEG沉淀法洗去其中残余的杂离子，(6)酶沉淀经重悬，加入单宁酸使残留的部分PEG和单宁酸结合生成沉淀并离心除去，上清经冷冻升华干燥获得符合试剂盒纯度要求的诊断酶。该方法简单易行，可以很方便地从含有钠、钾、氨等离子和杂蛋白的发酵粗酶液中将酶提纯出来，获得符合诊断原料要求的酶。该方法酶的得率高，杂离子水平可控制，无需上柱脱盐，无需透析，易于扩大生产。 | ||
| 搜索关键词： | 纯化 丙酮酸 激酶 方法 | ||
【主权项】：
一种纯化丙酮酸激酶的方法，其包括如下步骤：(1)将发酵液匀浆，得粗酶液；(2)对粗酶液进行稳定化处理；(3)对进行稳定化处理后的粗酶液进行热冷处理；(4)对步骤(3)所得粗酶液进行酸碱处理；(5)用PEG沉淀法将酶从含杂离子的粗酶中沉淀出来，将沉淀重悬，继续用PEG沉淀法洗去其中残余的杂离子，得酶泥；(6)将步骤(5)所得的酶泥重悬，加入单宁酸使PEG和单宁酸结合生成沉淀并离心除去，上清液经冷冻升华干燥获得符合试剂盒纯度要求的诊断用酶。
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