[发明专利]新型完整蛋白质微捕集器的制备方法和应用

摘要

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种新型完整蛋白质微捕集器的制备方法和应用。本发明先采用氢氧化钠溶液处理商品化的反相色谱填料，将处理后的填料悬浮于以甲基三乙氧基硅烷为前驱体的溶胶溶液中，由加压装置将悬浮液引入到毛细管中适当长度，经前躯体的水解和缩聚制得具有三维网状空间结构的完整蛋白质微捕集器。将该微捕集器用于液相色谱中完整蛋白质样品的捕集，浓缩，除盐，蛋白质回收率高，捕集器捕集容量大，且无需柱塞，制备方法简单有效。该微捕集器在蛋白质组学等领域有良好的实用价值和应用前景。

主权项

一种完整蛋白质微捕集器的制备方法，其特征在于具体步骤如下： (1) 采用氢氧化钠溶液分别浸泡C4，C8和C18反相色谱填料，超声处理，以活化表面封端的填料，增加固定相表面裸露的硅羟基数目；超声结束后，离心弃去上清液，加入去离子水洗涤填料，以除去表面的氢氧化钠溶液，离心弃去上清液，重复两次；将处理后的C4，C8和C18反相色谱填料烘干备用；(2) 采用溶胶凝胶法制备高通透性，高机械强度的毛细管柱上塞子；(3) 采用溶胶凝胶法制备完整蛋白质微捕集器将步骤(1)所得处理后的C4，C8 或C18反相色谱填料悬浮于以甲基三乙氧基硅烷为前驱体的溶胶溶液中，得到悬浮液；所述前驱体溶胶配方如下: 30 µL 甲基三乙氧基硅烷，100 µL 二氯甲烷， 50 µL 三氟乙酸，5 µL 水；采用加压装置将所得悬浮液引入步骤（2）所得带有塞子的毛细管中适当长度后，用硅橡胶垫将毛细管塞子端堵住；悬浮液在毛细管柱内凝胶化1.8‑2.2小时后, 将凝胶化后的毛细管柱放入烘箱中，95‑105ºC老化20‑28h；老化过程中，采用小气流的氮气始终保持通气状态，以吹出多余凝胶，老化后，除去毛细管柱上塞子，所得即为微捕集器。