[发明专利]一种川贝母培养物快速生产中的有效除菌方法

摘要

本发明公开了一种川贝母培养物快速生产中的有效除菌方法，该方法主要是依据抗生素对细菌生长的抑制作用，通过采用特定的步骤而对快速生产川贝母培养物中的染菌材料进行除菌的，所采用的步骤包括染菌材料的选取→预处理→液体除菌→第一次固体除菌→第二次固体除菌→除菌检测。本发明能在不伤害培养物的情况下有效地清除在川贝母培养物快速生产中出现的细菌污染，其最高除菌率达92.7％。

主权项

一种川贝母培养物快速生产中的有效除菌方法，其特征在于包括下列步骤：(1)染菌材料的选取：定期观察川贝母培养材料生长状况，一旦肉眼观察到材料或培养基中有细菌产生时，即将培养材料取出；(2)预处理：将取出的培养材料先用无菌水冲洗2～5次，并用无菌滤纸反复吸干材料表面的水分，再放入头孢噻肟钠浓度为200～500mg·L‑1的抗生素水中浸泡6～12min，其间不停振荡，取出后用无菌滤纸反复吸干材料表面的水分；(3)液体除菌：将预处理后的材料接入含有抗生素的MS+6‑BA 2.0mg·L‑1+NAA 0.3mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1液体培养基中培养1～2周，摇床转速100～120r·min‑1，培养条件为每天光照8～12小时，光照强度为1000～1600lx，温度18～22℃，所述抗生素的种类及浓度为头孢噻肟钠300mg·L‑1～800mg·L‑1或头孢噻肟钠150mg·L‑1～300mg·L‑1+头孢曲松钠150mg·L‑1～300mg·L‑1；(4)第一次固体除菌：取出经液体除菌的材料，用无菌滤纸反复吸干材料表面的水分，再接入含有与(3)步骤相同种类和浓度的抗生素的MS+6‑BA 2.0mg·L‑1+NAA 0.3mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂6.5g·L‑1固体培养基中进行第一次除菌培养，培养时间为25～30天，培养条件为每天光照8～12小时，光照强度为1000～1600lx，温度18～22℃；(5)第二次固体除菌：取出经(4)步骤除菌后的材料，转接入含有与(4)步骤相同种类但浓度减半的抗生素的MS+6‑BA2.0mg·L‑1+NAA0.3mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂6.5g·L‑1固体培养基中进行第二次除菌培养，培养时间为25～30天，培养条件为每天光照8～12小时，光照强度为1000～1600lx，温度18～22℃；(6)除菌检测：取出经(5)步骤除菌后的材料，转接入无抗生素的MS+6‑BA 2.0mg·L‑1+NAA 0.3mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂6.5g·L‑1的固体培养基中进行继代培养，在培养25～30天后观察材料除菌情况，并统计除菌率。