[发明专利]一种同时测定驴胶补血制剂中六种氨基酸含量的HPLC测定方法

摘要

本发明涉及一种同时测定驴胶补血制剂中六种氨基酸含量的HPLC测定方法，其包含步骤：提供驴胶补血制剂样品；提供氨基酸标准品；将驴胶补血制剂样品和氨基酸标准品分别加入异硫氰酸苯酯-乙腈溶液中，混匀静置后分别加入正己烷，再次混匀静置后分别取其下层溶液，过滤得衍生化后的驴胶补血制剂样品溶液和衍生化后的氨基酸标准品溶液；吸取衍生化后的驴胶补血制剂样品溶液和衍生化后的氨基酸标准品溶液注入液相色谱仪，进行氨基酸的测定。本发明通过采用反相高效液相测定了驴胶补血制剂中6种主要氨基酸的含量，样品处理方法较简单，测试方法的专属性、重复性、准确度都较好，能很好地控制驴胶补血颗粒的内在质量。

主权项

1.一种同时测定驴胶补血制剂中六种氨基酸含量的HPLC测定方法，其特征在于，包含步骤：1)将驴胶补血制剂样品置安瓿瓶中，加入5-7mol/l盐酸，130℃-160℃水解，将水解后的溶液移入蒸发皿中，用水洗涤，将洗液并入蒸发皿，水浴蒸干，残渣加入0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至量瓶中，加入0.05-0.15mol/L盐酸溶液稀释，摇匀、离心后取上清液即得驴胶补血制剂待测品溶液；2)取6种氨基酸对照品：L-谷氨酸、L-羟脯氨酸、甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸和L-脯氨酸，将以上6种氨基酸对照品加入0.1mol/L盐酸溶液溶解，制得氨基酸混合标准品溶液；3)将步骤1)所述驴胶补血制剂待测品溶液和步骤2)所述基酸混合标准品溶液分别加入异硫氰酸苯酯-乙腈溶液中，混匀、静置后分别加入正己烷，再次混匀、静置后分别取其下层溶液，进行过滤，得衍生化后的驴胶补血制剂样品溶液和衍生化后的氨基酸标准品溶液；4)吸取步骤3)获得的衍生化后的驴胶补血制剂样品溶液和衍生化后的氨基酸标准品溶液注入液相色谱仪，进行驴胶补血制剂中氨基酸的测定，其中，色谱条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相A为乙腈与醋酸钠、磷酸二氢钠或磷酸二氢钾三种中的任意一种或两种的组合，流动相B为乙腈-水，检测波长为254nm，流速为1.0ml·min^-1，柱温为30℃，按下表中的梯度进行洗脱：5)根据步骤4)所得色谱图计算驴胶补血制剂中L-谷氨酸、L-羟脯氨酸、甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸和L-脯氨酸的含量。