[发明专利]一种实时荧光定量PCR检测花生LOX基因mRNA表达水平的方法无效
| 申请号： | 201010557312.4 | 申请日： | 2010-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN101988127A | 公开（公告）日： | 2011-03-23 |
| 发明（设计）人： | 单世华 | 申请（专利权）人： | 山东省花生研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 266100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 该发明涉及一种实时荧光定量PCR检测花生LOX基因mRNA表达水平的方法。利用SYBR Green I实时定量PCR检测LOX基因mRNA表达水平，构建所要检测基因标准品后，可以对该基因扩增的起始模板的拷贝数进行精确的定量，还可以通过熔解曲线判断扩增产物的特异性，是一种灵敏度高、特异性好的检测技术。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 实时 荧光 定量 pcr 检测 花生 lox 基因 mrna 表达 水平 方法 | ||
【主权项】：
一种实时荧光定量PCR检测花生LOX基因mRNA表达水平的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)从花生组织中提取总RNA，反转录成cDNA，以所述cDNA为模板扩增获得LOX基因片段，将LOX基因片段与载体连接，构建重组质粒；(2)将上述重组质粒转化感受态细胞，并从中提取含有LOX基因的重组质粒，计算重组质粒的拷贝数，将重组质粒稀释成不同倍数，即为实时荧光定量PCR反应的标准品模板；以所述的标准品模板进行实时荧光定量PCR，绘制标准曲线；(3)提取被检测花生组织的总RNA，反转录成cDNA作为实时荧光定量PCR模板，以步骤(1)中相同的扩增引物进行实时荧光定量PCR，与标准曲线比较得出起始模板的拷贝数，确定被检测花生组织的mRNA表达水平。
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