[发明专利]新型抗乳腺癌多肽疫苗

摘要

本发明公开了新型抗乳腺癌多肽疫苗的研制方法，其特征在于包括一个来源于HER2/neu(表皮生长因子受体)的多肽片段(E75或342-350肽段)，一个效应T细胞(Th，T辅助细胞)抗原决定基，和一个TLR(toll-like receptor，toll样细胞受体)的配基，连接这三组分的半胱氨酸。这些TLR的配基可以结合到树突状细胞表面的某些TLR上，促进了树状细胞的成熟和炎症因子的释放，也增强了树突状细胞对衍生多肽的吞噬和递呈；第二部分由Th抗原决定基组成，抗体产生的过程中需要CD4+Th细胞的参与，递呈细胞(APC)将抗原递呈到细胞表面的MHC上，需要激活CD4+Th细胞，才能引起细胞免疫过程；第三部分是多肽片段，它是由HER2/neu蛋白衍生出的肽链(E75或342-350)，可有效诱导体液免疫，当其与免疫辅助物相结合，可以有效地诱导蛋白特异性免疫应答。

主权项

一种新型抗乳腺癌E75多肽疫苗，其特征在于包括一个来源于HER2/neu(表皮生长因子受体)的E75多肽片段，一个效应T细胞(Th，T辅助细胞)抗原决定基，一个TLR(toll‑likereceptor，toll样细胞受体)的配基，和连接这三组分的半胱氨酸，该疫苗的研制方法为：①以半胱氨酸为底物，通过高氯酸的氧化作用形成二聚化的半胱氨酸，加入乙酸叔丁酯与氨基酸的羧基酯化，加入棕榈酰氯，在氨基处形成酰化反应，还原二硫键并加入环氧丙醇，在巯基处形成开环氧的氧化反应，再加入棕榈酰氯，在两个羟基处发生酰化反应，去掉最初半胱氨酸上的保护基，便制出Pam3Cys化合物；②氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团Fmoc‑保护的氨基酸共价连接在固相载体上，20％pipe的作用下，脱掉氨基的保护基，这样第一个氨基酸就接到了固相载体上了，DIEA提供一个碱性的反应环境，HBTu作为缩合剂，将第二个氨基酸再与已接在固相载体的第一个氨基酸的氨基反应形成肽键，这样在固相载体上就生成了一个带有保护基的二肽，重复上述肽键形成反应，使肽链从C端向N端生长，直至达到所需要的肽链长度，脱去保护基Fmoc‑，水解肽链和固相载体之间的酯键，就得到了合成好的肽；③最后，将Pam3Cys上的羧基和E75多肽上的氨基通过缩合反应连接。