[发明专利]培养碱性土壤中优势菌--真菌的方法

摘要

本发明公开了一种培养碱性土壤中优势菌--真菌的方法，属于土壤微生物的分离纯化技术领域。该方法用改良后的马丁氏培养基培养碱性土壤中的真菌，通过采样、选择性培养、平板菌落计数(即活菌计数)、培养基的制备、高压蒸汽灭菌等步骤对碱性土壤中的微生物真菌进行分离计数。实现了真菌的培养基培养条件与土壤中的生长条件保持一致，利于更加精确地测定碱性土壤中其优势菌--真菌的含量。

主权项

一种培养碱性土壤中优势菌‑‑真菌的方法，其特征在于，该方法通过以下步骤实现：(1)样本采集及处理采集碱性土样，每个地点在不同位置至少各取3个样.每点取样量一致，将土样均匀混合并用无菌袋分装；(2)改良马丁氏培养基配制改良马丁氏培养基由如下组分以重量份组成：K3PO41份，NaCl 4份，MgSO4.7H2O 0.5份，蛋白胨5份，葡萄糖10份，琼脂15‑20份，水1000份。用10％NaOH调其PH与上述碱性土壤的PH值一致，将其分装、包扎、灭菌。(3)、制作平板将步骤(2)经过灭菌、改良后的马丁氏培养基置于水浴锅中冷却到45～50℃立刻倒平板，培养基需满皿底的2/3，凝固后即制成平板；(4)、制备土壤稀释液称取步骤(1)采取的碱性土样，使土样与无菌水充分混合，成为土壤悬液，经过稀释制备出不同稀释度的土壤稀释液；(5)、涂布用无菌吸管分别从步骤(4)制得的不同稀释度的土壤稀释液中各吸取菌液涂布均匀于步骤(3)已备好的平板上；静置，放入温箱倒置培养；(6)、优势菌的分离纯化用接种环以无菌操作法分别从上述平板培养基上不同形态菌落中挑取一环菌种，在改良后的马丁氏培养基中进行划线分离，并标记优势菌种，放入恒温培养箱中培养观察；重复以上操作至培养基上出现单一菌种，将纯化后的菌种编号并接种在相应选择培养基中，培养后保存备用。