[发明专利]绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建有效
| 申请号： | 201010580022.1 | 申请日： | 2010-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN102181447A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 刘明军;贺三刚;李文蓉;张雪梅;张宁 | 申请（专利权）人： | 新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/10;C12N15/867;A01K67/027 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐新科联专利代理事务所(有限公司) 65107 | 代理人： | 欧咏 |
| 地址： | 830000 新疆维吾尔自治*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 本发明的绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；其引物酶切位点外侧含有保护碱基ATA和CGA；将目的基因克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a-Noggin重组载体；设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC(包含HA抗体标签)；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒载体中，获得Noggin基因慢病毒载体，生产重组病毒，生产转Noggin基因绵羊；通过PCR方法鉴定其转基因羊。 | ||
| 搜索关键词： | 绵羊 noggin 基因 克隆 病毒 表达 载体 构建 | ||
【主权项】：
绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，其特征在于：1)确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；2)设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；上下游引物酶切位点外侧含有酶切的保护碱基ATA和CGA；3)将目的基因定向克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a‑Noggin重组原核表达载体；4)设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC(包含HA抗体标签)；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒表达载体中，获得Noggin基因慢病毒载体，生产重组病毒，利用慢病毒卵生产转Noggin基因绵羊；5)通过PCR方法鉴定转基因羊。
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