[发明专利]一种土壤胞内蛋白质的提取分离方法

摘要

本发明提供了一种土壤胞内蛋白质的提取分离方法，该方法采用柠檬酸钠提取液提取去除土壤胞外蛋白质，采用SDS提取液提取、溶解土壤胞内蛋白质，经Tris-饱和酚、甲醇-醋酸铵等进一步进行胞内蛋白质的提取，然后通过双向电泳分离。提取的土壤胞内蛋白质经SDS-PAGE检测后条带、蛋白质点清晰，是国际上首次提出的土壤胞内蛋白质的提取分离方法。

主权项

一种土壤胞内蛋白质的提取分离方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：（1）土壤胞内蛋白质提取：取0.8‑1.5g土壤，加入0.05mol/L，pH8.0的柠檬酸钠缓冲液4‑6mL，于漩涡振荡器中振荡2.5‑4小时，15000rpm离心25min，弃上清液；取沉淀，加入0.05mol/L，pH8.0柠檬酸钠缓冲液4‑6mL并于漩涡振荡器中振荡10‑20min，然后15000rpm离心25min，弃上清液，重复2次；取沉淀，加入SDS缓冲液4‑6mL，于漩涡振荡器中振荡50‑80min；振荡结束后，15000rpm离心25min，收集上清液，并过0.45μm的微孔滤膜，取滤液添加pH为8.0的Tris‑饱和酚2‑3mL，置于漩涡振荡器中振荡25‑40min，静置20‑50min，然后15000rpm离心25min，取下层酚相，加入5倍体积预冷至4oC的0.1mol/L甲醇‑醋酸铵溶液，置于‑20oC条件下沉淀、过夜，然后15000rpm离心25min；弃上清液，沉淀中加入甲醇洗涤，15000rpm离心25min，去除甲醇上清液，用丙酮洗涤沉淀，15000rpm离心25min，去上清液，重复1～2次；取沉淀，将沉淀于超净台中吹干，获得蛋白质干粉；（2）土壤胞内蛋白质分离：取1.2mg蛋白质干粉，加入300μL蛋白质裂解液，制成蛋白质样品，进行双向电泳分离。