[发明专利]一种低成本培养基工业化生产溶藻菌的制备方法

摘要

本发明公开了一种低成本培养基工业化生产溶藻菌的制备方法，其步骤：A、溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种培养基：①配制培养基；②灭菌：培养基配制好后采用高压蒸汽灭菌；B、溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种的培养：将（A）步骤中的第一步①的溶藻菌菌种在上述步骤②中（A）步骤①试管培养基中繁殖的Ⅰ级溶藻菌级菌种接种后放在培养架上或生物培养箱内培养；C、Ⅲ级溶藻菌种子规模化生产培养：①培养基配制：调节pH至；②操作：a：溶藻菌Ⅲ级种子:将培养好的Ⅱ级菌种接种入配制好的（C）步骤中的①培养基；b:规模化生产方法：得到溶藻菌成品。方法易行，操作简便，降低了富营养化水体，控制了蓝藻水华爆发。原料来源容易，生产成本低廉，适宜工厂化生产。

主权项

一种低成本培养基工业化生产溶藻菌的制备方法，其步骤是：A、溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种培养基：① 配制培养基：硝酸钠100‑110mg，磷酸氢二钾3‑4mg，硫酸镁7‑8mg，氯化钙3‑4mg ，柠檬酸0.5‑0.6mg，柠檬酸铁铵0.5‑0.7mg，乙二胺四乙酸0.5‑0.7mg， 碳酸钠1‑3mg， A5 + Co Solution （A5溶液），蒸馏水99.9 ml，5‑6 g/升大豆胰蛋白，混合溶解后得培养基，培养基Ph=7.6；② 灭菌： 培养基配制好后采用高压蒸汽灭菌，当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min灭菌结束，培养基降到常温后，进行接种，接种在无菌室内的超净工作台上进行，接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开，灭菌1h，试管、平板和三角瓶接种在超净工作台上分别按斜面接种、平板划线和液体培养接种法进行接种；   B、 溶藻菌Ⅰ、溶藻菌Ⅱ菌种的培养：将溶藻菌原种接种在经过A步骤中的①②灭菌好的培养基中，将经过A步骤①②试管培养基中繁殖而成的Ⅰ级溶藻菌菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养，温度控制在25～29℃，每天应摇动2～3次为宜；培养的Ⅰ级溶藻菌菌种要定期更换,斜面和平板三个月换一次；液体试管或小三角瓶夏季保种19～21天,冬季一个月换一次培养基，Ⅱ级溶藻菌种子培养接种后放在恒温摇床上振动培养，温度控制在25～29℃，每天摇动2～3次，Ⅱ级溶藻菌菌种培养5～7天后，Ⅱ级菌种进行Ⅲ级溶藻菌种子培养；C、 Ⅲ级溶藻菌种子规模化生产培养：① 培养基配制： 用上述（A）步骤的①培养基：磷酸氢二钾3‑4mg ， 硫酸镁7‑8mg，豆腐废水 1000ml，调至pH=7.6，将豆腐水用双层纱布过滤，再用自来水或深井水与过滤后豆腐水按照1：1比例稀释；然后加入溶解好的磷酸氢二钾和硫酸镁，调节pH至7.6；   ② 操作： a：溶藻菌Ⅲ级种子:将培养好的Ⅱ级菌种接种入配制好的（C）步骤中的①培养基，接种量为10%，将接种好的培养基分装入25L的清洗干净的塑料壶或桶中，把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎，在壶口插上通气和出气管各一支，在28～32℃条件下通气发酵培养，5天发酵完成，作为规模化生产的种子；b: 规模化生产方法：发酵池：10m3 ；配制5% 84消毒液，喷洒在发酵池壁和底部，24h后，用干净的深井水清洗发酵池，取配制好的（C）步骤中的①培养基7～8 m3放入10 m3的发酵池中，加溶藻菌Ⅲ级种子1m3，然后加培养液至10m3，最后用塑料薄膜密封，28～32℃发酵培养，6～8天后得到溶藻菌成品。