[发明专利]一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法无效
| 申请号： | 201010592737.9 | 申请日： | 2010-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN102094036A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 王华岩;韩翠芹;李军华 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法，该系统由pGT-V1和pGT-V2两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的LoxP元件，其间分别含有正筛选标记基因Neo/GFP和Hyg/RFP，外侧含有一个负筛选标记基因TK。同时设计两个“8碱基”多克隆位点分布在两个LoxP元件与负筛选标记之间以供同源臂的插入。本发明构建的打靶载体系统将两个互补的打靶载体共转染受体细胞，经过药物和荧光双筛选标记的选择，一次性实现对靶基因两个等位基因的遗传修饰或敲除，并且可以通过转入Cre酶与LoxP元件相互作用去除整合到基因组上的筛选标记基因，能够缩短获得纯合敲除靶细胞的时间，提高转基因动物的安全性，为开展动物转基因研究提供有价值的技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 等位基因 打靶 载体 系统 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种等位基因双敲除打靶载体系统，其特征在于：该系统由pGT‑V1和pGT‑V2两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的LoxP元件，其间含有两个正筛选标记基因，外侧含有一个负筛选标记基因，即pGT‑V1带有正筛选标记新霉素磷酸转移酶基因和绿色荧光蛋白基因，pGT‑V2带有正筛选标记潮霉素基因和红色荧光蛋白基因，二者都含有负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。
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