[发明专利]一种从霞水母刺丝囊毒素内分离热激蛋白60的方法

摘要

本发明涉及海洋生物技术领域，具体的说是一种分离纯化热激蛋白60(Heat Shock Protein 60，Hsp60)的方法。其分离方法如下水母刺丝囊细胞经超声破碎提取得到水母粗毒素，透析除盐后先后利用阴离子交换和凝胶过滤技术分离到Hsp60，测得其分子量为60kDa，本发明具快速、简便的特点，为获得Hsp60蛋白提供了新的方法。

主权项

一种从霞水母刺丝囊毒素中分离热激蛋白60的方法，其特征在于：1)将从霞水母触手中得到的霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎，破碎后低温离心，收集上清液，待用；2)步骤1)所得上清液即为霞水母刺丝囊细胞毒素于2‑6℃下对pH7.8 20mM Tris‑HCl缓冲液透析过夜，然后低温离心，收集上清液，待用；3)将步骤2)所得上清液过滤，而后将其上含DEAE SepharoseFast Flow的阴离子交换树柱进行分离，首先采用pH7.8 20mMTris‑HCl缓冲液洗脱，而后采用含有浓度分别为0.1‑2M不同浓度的NaCl的pH7.8 20mM Tris‑HCl缓冲液进行梯度洗脱，收集各洗脱峰，而后用截留分子量为3kDa的超滤管浓缩，待用；4)将步骤3)用截留分子量为3kDa的超滤管浓缩的浓缩物用凝胶树脂Superdex75柱纯化分离，采用含有浓度为0.15‑0.5M的NaCl的pH7.8 20mM Tris‑HCl缓冲液洗脱，流速为0.2‑0.5mLmin‑1，收集各洗脱峰，其中流出体积50mL‑80mL内的组分即为热激蛋白60。