[发明专利]罗丹明B的免疫亲和柱-高效液相-质谱联用检测方法

摘要

罗丹明B的免疫亲和柱-高效液相-质谱联用检测方法，属于免疫学检测技术领域。本发明以抗罗丹明B的抗体与四甲氧基硅烷（TMOS）偶联包埋于层析柱中，通过吸附、洗脱达到样品净化的效果，再进行高效液相-质谱联用检测。本发明方法可以简化罗丹明B残留检测的样品处理过程，同时可达到净化浓缩的效果，成本低廉，快速，便携。

主权项

一种罗丹明B的免疫亲和柱‑高效液相‑质谱联用检测方法，其特征在于以抗罗丹明B的抗体与四甲氧基硅烷TMOS偶联包埋于层析柱中，通过吸附、洗脱达到样品净化的效果，最后通过高效液相‑质谱联用检测；A、罗丹明B的免疫亲和柱的制备，步骤为：（1）取0.2mL的0.04mol/L HCl溶液，0.75mL的去离子水，3.4mL的四甲氧基硅烷TMOS混匀，4℃保存2‑3min；取出，超声粉碎30min；（2）取一质量已知的烧杯，吸取20μL罗丹明B抗体，用pH7.4、0.01mol/L PBS稀释至1mL，得罗丹明B抗体溶液，4℃保存；（3）取步骤（1）超声完全后的混合液，吸取其中1mL试样，加入罗丹明B抗体溶液中，混匀，使之凝胶；（4）待凝胶结束后，烧杯称重，置于37℃恒温烘箱凝胶老化，待凝胶失去初重的50%时，老化过程结束，将1g老化后的凝胶研磨粉碎，装柱；（5）待柱中凝胶沉积稳定后，用5mL pH7.4、0.01mol/L的PBS预淋洗，洗去未包埋的罗丹明B抗体和其他干扰杂质，最后用5mL pH7.4、0.01mol/L的PBS平衡，即制得罗丹明B的免疫亲和柱；B、罗丹明B的免疫亲和柱的吸附、洗脱：平衡：10mL pH7.4、0.01mol/L的PBS；上样：待测的样品溶液；洗涤：用5mL pH7.4、0.01mol/L的PBS洗涤，再用5mL超纯水洗涤；洗脱：5mL甲醇洗脱，收集洗脱液待测；C、高效液相‑质谱联用检测，步骤为：（1）以一定水平的罗丹明B加入辣椒粉样品中，在室温下至少静置15 min；（2）取上述添加罗丹明B的辣椒粉样品1g，加入10mL含体积百分20%丙酮的正己烷，震摇10 min，静置、过滤使分离出上层清液，残渣加入10mL含体积百分20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀；（3）移取提取液于氮吹仪上吹干，用0.01M PBS重溶，吹干后的样品用0.01M PBS以质量计稀释10倍；（4）用10mL 0.01M PBS平衡免疫亲和柱；（5）加样，用5mL 0.01M PBS洗涤，再用5mL超纯水洗涤，洗去未吸附样品；（6）5mL甲醇溶液洗脱柱上样品，收集洗脱液；（7）洗脱液经0.22 µm孔径的聚四氟乙烯膜过滤后进行高效液相‑质谱联用检测。