[发明专利]利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法

摘要

本发明提供一种利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法。本发明采用肠球菌选择性培养基滤膜法分离纯化肠球菌，选用琼脂扩散法检测肠球菌对抗生素的抗药表型，从而建立已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库并对其进行分析，将从海洋水体样本中分离得到的未知源肠球菌的抗生素抗性指纹与已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库进行比对，依据相似性大小排序确定其最大可能来源，并据此识别海洋水体中粪便污染来源。本发明具有所需仪器设备简单、检测成本低、耗时短等优点，能够满足有关研究单位、环境监测与管理部门对近岸海域粪便污染监测、管理的需求。

主权项

一种利用肠球菌抗生素抗性识别海洋水体粪便污染来源的方法，该方法包括：肠球菌分离纯化步骤，在该步骤中，选择合适梯度体积的粪便样本，以带栅格纤维滤膜和肠球菌选择性琼脂培养基为基质，在36±1℃下培养2天后挑取符合肠球菌形态特征的菌落进行2～3次纯化，对经生化鉴定后确定为肠球菌的菌株进行保存；已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库的建立与分析步骤，在该步骤中，采用琼脂扩散法，以MH琼脂培养基为基质，检测肠球菌对10种常用抗生素的抗药性，以“1”表示抗药，“0”表示敏感表示各菌株的抗药表型，即各菌株的抗生素抗性指纹，构建已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库，采用数据分析软件对图谱库进行判别分析；海洋水体粪便污染溯源分析步骤，在该步骤中，采用数据分析软件，将从海洋水体样本中分离得到的未知源肠球菌的抗生素抗性指纹与已知源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库进行比对，依据相似性大小排序确定其最大可能来源，并据此对采样海域水体中的粪便污染进行溯源。