[发明专利]一种水果或蔬菜上洋葱伯克氏菌群的检测及种的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种水果或蔬菜上洋葱伯克氏菌群的检测及种的鉴定方法，包括以下步骤：分离病健交界处菌群，提取DNA后，利用特异性引物进行PCR扩增，扩增产物经凝胶电泳分离后用指示剂显色，根据条带情况鉴定菌株是否属于洋葱伯克氏菌群；对每个菌株的PCR产物进行酶切，获得限制性酶切图谱，初步确定菌株的种；利用相应种的特异性引物进行PCR扩增，凝胶电泳分离后根据条带情况判断菌株的种；假如凝胶未呈现条带，则对该菌株前一次PCR产物进行测序，得到其recA序列，构建分子系统树，确定该菌株的种。本发明方法能够用准确地检测发病水果和蔬菜上存在Bcc菌，并明确Bcc菌群中的各个种，以便对危险性细菌采取有效的措施。

主权项

一种水果或蔬菜上洋葱伯克氏菌群的检测及种的鉴定方法，包括以下步骤：(1)取有腐烂症状的蔬菜或水果的病健交界处组织，在无菌水中捣碎后，涂布于PCAT平板上，培养后挑取乳白色的单菌落，纯化后提取菌株的DNA；(2)以每个菌株的DNA为模板，利用引物BCR1和引物BCR2进行PCR扩增，扩增产物经凝胶电泳分离后用指示剂显色，假如凝胶呈现1043bp的条带，说明该菌株属于洋葱伯克氏菌群；(3)用内切酶HaeIII对经鉴定属于洋葱伯克氏菌群的菌株的PCR产物进行酶切，获得限制性酶切图谱，初步确定菌株的种；(4)以初步确定种的菌株的DNA为模板，利用相应种的特异性引物进行PCR扩增，扩增产物经凝胶电泳分离后用指示剂显色，假如凝胶呈现条带，则确定该菌株的种与初步确定的种一致；(5)假如凝胶未呈现条带，则对该菌株步骤(2)中的PCR产物进行测序，得到其recA序列，构建分子系统树，确定该菌株的种。