[发明专利]适合将免疫原性分子递送到细胞中的突变CyaA多肽及多肽衍生物

摘要

本发明涉及突变CyaA/E570Q+K860多肽，其适合用作蛋白质载体将一种或更多种受关注的分子递送到细胞，特别是表达CD11b受体的细胞中。本发明还涉及适合引发宿主中的免疫应答的多肽衍生物。本发明更具体而言涉及得自毒素或类毒素形式下的腺苷酸环化酶蛋白质(CyaA)的多肽，其为突变多肽。所述突变多肽能够保留天然CyaA与靶细胞的结合活性，且优选还能够保留天然CyaA经过其N-端结构域进入靶细胞中的易位活性，并且此外其具有成孔活性，该成孔活性与天然CyaA毒素的成孔活性相比是降低的或受抑制的。

主权项

一种多肽，其为腺苷酸环化酶蛋白质的突变体(突变多肽)，并且其氨基酸序列包含下述序列之一或由下述序列之一组成：a)百日咳博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌或欣氏博德特氏菌的腺苷酸环化酶(CyaA)的氨基酸序列，其中已经进行下述突变：(i)570位的谷氨酸残基被谷氨酰胺残基(E570Q)或被保守氨基酸残基置换，和(ii)860位的赖氨酸残基被精氨酸残基(K860R)或被保守氨基酸残基置换，或；b)百日咳博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌或欣氏博德特氏菌的腺苷酸环化酶片段的氨基酸序列，该片段具有百日咳博德特氏菌的CyaA蛋白质结合靶细胞的能力以及使其N‑端腺苷酸环化酶酶结构域或所述N‑端腺苷酸环化酶酶结构域的部分易位进入所述细胞中的能力，其中所述片段还含有位于所述腺苷酸环化酶的570位和860位的下述突变氨基酸残基：E570Q和K860R，或c)氨基酸序列，由于一个或更多个氨基酸残基置换和/或插入，其不同于如在a)或b)中定义的氨基酸序列，并且其具有百日咳博德特氏菌的CyaA蛋白质结合靶细胞的能力以及使其N‑端腺苷酸环化酶酶结构域或所述N‑端腺苷酸环化酶酶结构域的部分易位进入所述细胞中的能力，其中所述氨基酸序列还含有位于所述腺苷酸环化酶的570位和860位的下述突变氨基酸残基：E570Q和K860R，或d)支气管败血性博德特氏菌的腺苷酸环化酶(CyaA)的氨基酸序列，其中已经进行下述突变：(i)569位的谷氨酸残基被谷氨酰胺残基(E569Q)或被保守氨基酸残基置换，和(ii)859位的赖氨酸残基被精氨酸残基(K859R)或被保守氨基酸残基置换，或；e)支气管败血性博德特氏菌的腺苷酸环化酶片段的氨基酸序列，该片段具有百日咳博德特氏菌的CyaA蛋白质结合靶细胞的能力以及使其N‑端腺苷酸环化酶酶结构域或所述N‑端腺苷酸环化酶酶结构域的 部分易位进入所述细胞中的能力，其中所述片段还含有位于所述腺苷酸环化酶的569位和859位的下述突变氨基酸残基：E569Q和K859R，或f)氨基酸序列，由于一个或更多个氨基酸残基置换和/或插入，其不同于如在d)或e)中定义的氨基酸序列，并且其具有百日咳博德特氏菌的CyaA蛋白质结合靶细胞的能力以及使其N‑端腺苷酸环化酶酶结构域或所述N‑端腺苷酸环化酶酶结构域的部分易位进入所述细胞中的能力，其中所述氨基酸序列还含有位于所述腺苷酸环化酶的569位和859位的下述突变氨基酸残基：E569Q和K859R。