[发明专利]AAD-1事件DAS-40278-9的检测

摘要

本发明部分涉及检测除草剂耐受性植物——更具体而言，玉米植物中的aad-1转化事件。本主题发明还提供了用于在样品(例如，玉米粒)中检测本主题事件的存在的测定法。还提供了可用于进行所述测定法的试剂盒和条件。本主题发明还部分涉及使用本主题方法的植物育种。在一些实施方案中，所述事件/多核苷酸序列可与其他性状“层叠”。更具体而言，本发明部分涉及用于AAD-1玉米事件40278-9的终点TaqMan PCR测定法。一些实施方案涉及能够进行高通量接合性分析的测定法。本主题发明进一步部分涉及优选的参照基因用于确定接合性的用途。

主权项

一种用于确定玉米植物的接合性的方法，所述植物包含AAD‑1玉米事件DAS‑40278‑9，所述事件包含转基因构建体，所述转基因构建体包含AAD‑1基因，所述转基因构建体的侧翼为5’侧翼玉米基因组DNA和3’侧翼玉米基因组DNA，所述方法包括：获得来自所述玉米植物的基因组DNA的DNA样品；通过将所述DNA样品与下述接触来产生接触的样品：a.第一事件引物和第二事件引物，其中所述第一事件引物特异性结合所述转基因构建体，所述第二事件引物特异性结合所述5’玉米基因组侧翼DNA或所述3’玉米基因组侧翼DNA，且其中所述第一事件引物和所述第二事件引物，当置于TAQMAN PCR条件下时，产生事件扩增子b.参照正向引物和参照反向引物，其当置于TAQMAN PCR条件下时，产生来自内源玉米参照基因的参照扩增子c.荧光事件探针，其与所述事件扩增子杂交d.荧光参照探针，其与所述参照扩增子杂交；将所述接触的样品置于基于荧光的终点TAQMAN PCR条件下；对杂交于所述事件扩增子的所述荧光事件探针进行定量；对杂交于所述参照扩增子的所述荧光参照探针进行定量；将杂交的荧光事件探针的量与杂交的荧光参照探针的量相比较；和通过比较杂交的荧光事件探针和杂交的荧光参照探针的荧光比来确定DAS‑40278‑9的接合性。