[发明专利]一种在丝状噬菌体上高密度表达目的多肽的方法和应用

摘要

本发明属于生物技术领域，通过构建能表达成含肠激酶酶切位点天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸（DDDDK）序列与目的多肽核酸序列的重组噬菌体，使目的多肽N端连接肠激酶酶切位点，表达产物经肠激酶作用，将氨基端的肠激酶酶切位点DDDDK切除，使目的多肽直接位于丝状噬菌体主要衣壳蛋白氨基端。有效地保留了pC89原有的表达密度高等优点，又解决了pC89表达的多肽氨基端必定携带五个氨基酸残基的缺陷，保证了多肽直接暴露于主要衣壳蛋白氨基端，进一步增强了多肽的特异性，使得表达出来的模拟表位肽与抗体的结合效率提高了10倍以上。

主权项

一种在丝状噬菌体上高密度表达目的多肽的方法，其特征在于包含下列步骤：（1）人工序列的设计与合成：用化学方法合成二条5′端分别有EcoRI和BamHI核酸内切酶位点的互补核苷酸序列，其含有能表达成肠激酶酶切位点天冬氨酸‑天冬氨酸‑天冬氨酸‑天冬氨酸‑赖氨酸（DDDDK）的核苷酸序列以及目的多肽的核苷酸序列；（2）序列导入噬菌体载体pC89：将二条互补序列退火后形成的DNA片段与经EcoRI和BamHI酶切的噬菌体载体pC89在DNA连接酶作用下连接，连接产物转化感受态的大肠杆菌（Escherichacoli）细胞，选择性培养基培养，挑单菌落进行阳性克隆鉴定；（3）重组噬菌体的表达与纯化:阳性克隆加入诱导物和辅助噬菌体进行扩增培养，收获并纯化表达有肠激酶酶切位点DDDDK和目的多肽的重组噬菌体；（4）将获得的重组噬菌体经肠激酶酶切，得到高密度表达在丝状噬菌体主要衣壳蛋白氨基端的目的多肽。