[发明专利]一种从动物肌肉中分离磷脂酶A2的方法

摘要

一种从动物肌肉中分离磷脂酶A2的方法，属于农产品加工技术领域。该方法从动物肌肉或加工后废弃的瘦肉中提取高分子量细胞浆质型磷脂酶A2纯品，首先进行粗酶提取，然后使用离子交换柱对磷脂酶A2进行纯化，获得的磷脂酶A2分子量约为201KD。本发明具有纯化方法快速简洁和所得磷脂酶A2对动物源磷脂的水解效率高的特点，在医药、食品、生化等领域具有广泛的应用前景。

主权项

一种从动物肌肉中分离磷脂酶A2的方法，包括以下步骤：1）取动物瘦肉组织剁碎后加入Tris‑HCl缓冲液中匀浆，形成浆液；2）在4℃的环境温度下，将浆液离心，取上清液，然后在上清液中加入70%饱和度的硫酸铵进行盐析，然后再在4℃的环境温度下离心，将沉淀物用Tris‑HCl缓冲液溶解，取得混合溶液；3）将混合溶液置于透析袋中，在Tris‑HCl缓冲液中进行去盐透析，取得去盐的透析物；4）将去盐的透析物在4℃的环境温度下离心去除变性蛋白，取得磷脂酶A2粗品；5）用蛋白纯化系统纯化磷脂酶A2粗品，得磷脂酶A2纯品；其特征在于：所述步骤5）中，蛋白纯化系统为：采用source 15Q、15×5.5 cm的离子交换柱，用pH为8.0、浓度为50mmol/L、流速为0.1mL/min 的Tris‑HCl缓冲液平衡，待紫外吸收和电导基线稳定后，再用pH为8.0、含1mol/LNaCl的Tris‑HCl缓冲液进行线性洗脱，控制NaCl的Tris‑HCl缓冲液进入离子交换柱的流速为1.5mL/min，开始收集滤出液，当滤出液的NaCl浓度达到100%停止收集；将收集的滤出液进行超滤浓缩，取得磷脂酶A2纯品。