[发明专利]山羊黄体细胞系的建立方法

摘要

本发明属于生物动物细胞系领域，具体涉及一种妊娠早期萨能奶山羊黄体细胞系的建立方法。本发明利用怀孕6-8周的健康萨能奶山羊的黄体组织为细胞来源，用胶原酶消化黄体组织从而得到离散的黄体细胞，并在体外进行扩大培养和纯化。利用脂质体把人端粒酶逆转录酶基因转染纯化后的黄体细胞内，并用抗性基因进行筛选，挑取单克隆进行扩大培养。然后通过组织细胞化学染色进行鉴定。本发明黄体细胞系细胞呈多角型或梭型，3β-羟基类固醇脱氢酶染色呈阳性，此外还保持了原代黄体细胞的一些重要特征。

主权项

一种山羊黄体细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原代培养和纯化：取妊娠6‑8周的健康萨能奶山羊黄体，无菌条件下消化黄体组织，并把得到的黄体细胞接种到细胞培养瓶里，用DMEM/F12进行培养，所述DMEM/F12含有15％胎牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素；并置到37℃、5％CO2培养箱进行培养；等细胞长满培养瓶后进行传代，用柠檬酸‑胰蛋白酶差速消化进行纯化；(2)转染和筛选：对细胞纯度达到95％以上的原代黄体细胞利用脂质体转染人端粒酶逆转录酶基因，并用G418进行筛选2‑3周，挑取单克隆并用组织细胞化学染色进行鉴定；(3)扩大培养：对阳性细胞进行扩大培养，3天传代一次，分种率1∶2，待细胞传到30代时进行鉴定试验，并测定转染前后山羊黄体细胞的生长曲线。