[发明专利]一种新的顺丁烯二酸异构酶及应用有效
申请号: | 201110026297.5 | 申请日: | 2011-01-25 |
公开(公告)号: | CN102604922A | 公开(公告)日: | 2012-07-25 |
发明(设计)人: | 朱敦明;吴洽庆;李正华;赵青;任杰;董文玥;刘祥涛 | 申请(专利权)人: | 天津工业生物技术研究所 |
主分类号: | C12N9/90 | 分类号: | C12N9/90;C12N15/61;C12N15/70;C12P7/46;C12R1/19 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 300308 *** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明公开了一类新的顺丁烯二酸异构酶的发现和应用的方法,包括:1、从Rhodococcus sp.RHA1全基因组中找到可能具有顺丁烯二酸异构酶活性的蛋白质的全长基因序列(SEQ NO.1),在发现与之对应的蛋白不具有酶活性后,对该基因5’进行缺失改造,在不改变阅读框架的前提下,缺失长度为126-234bp,获得了具有异构酶活性的酶蛋白分子的一组基因序列,统称为:SEQ NO.22、构建含有SEQ NO.2基因序列的重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌,获得基因工程菌种。3、应用a、工程菌发酵表达具有异构酶活性的可溶性蛋白;b、使顺丁烯二酸转化成反丁烯二酸的方式可以是全菌细胞或固定化菌细胞也可以是破碎的菌细胞液,转化条件温和。本发明中的异构酶工程菌可以用于规模化生产反丁烯二酸。 | ||
搜索关键词: | 一种 丁烯 二酸异构酶 应用 | ||
【主权项】:
一种新的顺丁烯二酸异构酶,其特征在于:包括采用分子生物学技术方法,对人工全合成的SEQ NO.1基因序列5’端进行缺失,得到包含具有如SEQ NO.2序列的工程菌,发酵得到可溶性异构酶蛋白,并用于底物异构化。
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