[发明专利]中国人群耳聋基因筛查用试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了一种针对中国人群耳聋基因常见的7个突变位点的一次性定性筛查试剂盒及其使用方法，以GJB2基因235位点的delC和299-300位点delAT，SLC26A4基因2168位点的A→G突变和IVS7-2位点的A→G突变，线粒体DNA基因1555位点的A→G突变、3243位点的A→G突变和7445位点A→G突变共7个突变热点为检测对象，针对每个位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个目的位点同时进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，一次获得7个位点的基因型。本发明的筛查方法及试剂盒使用方便，操作简单，成本低，通量高，检测结果直接可靠，适合于中国人群耳聋基因突变的大规模筛查。

主权项

一种中国人群耳聋基因突变热点的筛查试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下内容：(1) PCR反应试剂，包括dNTP、5×和10×PCR缓冲液、Mg2+离子、FastTaq酶、SNaPshot Multiplex 混合液；(2) 等比例混合的针对耳聋基因6个区段进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物； (3) 按一定比例混合的针对耳聋基因7个突变热点的PCR延伸引物；(4) 纯化试剂，包括SAP酶、Exon I酶及其配套的缓冲液；(5) 对照标本，包括单个位点纯合、杂合突变的阳性对照标本、阴性对照标本,所述试剂盒以GJB2基因235位点的delC和299‑300位点delAT，SLC26A4基因2168位点的A→G突变和IVS7‑2位点的A→G突变，线粒体DNA基因1555位点的A→G突变、3243位点的A→G突变和7445位点A→G突变共7个突变热点为检测对象，针对每个位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个目的位点同时进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，一次获得7个位点的基因型。