[发明专利]pET15b-PEP-1-VP3质粒及构建、PEP-1-VP3融合蛋白及表达在审
| 申请号： | 201110030897.9 | 申请日： | 2011-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN102618567A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 石小燕;邓守恒;陈萍 | 申请（专利权）人： | 石小燕 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K19/00;C07K1/22;A61P35/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 十堰博迪专利事务所 42110 | 代理人： | 高良军 |
| 地址： | 430014*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提出了pET15b-PEP-1-VP3质粒及构建、PEP-1-VP3融合蛋白及表达。具体如下：以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板，设计合成上下游引物进行PCR扩增，扩增条件：起始变性95℃1min，然后执行如下反应条件：95℃30s，68℃3min，35个循环，最后68℃延伸3min。PCR产物经低熔点琼脂糖凝胶电泳后鉴定，回收并纯化366bp的VP3cDNA片段；因表达的PEP-1-VP3融合蛋白主要以包涵体形式存在，将收集的菌体溶于50ml缓冲液A中，400W、10min、间隔5min，4℃超声破菌破包涵体41min。破菌完全的菌液较清，置超速冷冻离心机中20000rpm、4℃离心10min，融合蛋白以可溶性形式存在于上清中，将上清液缓慢加入Ni2+-氮基三乙酸琼脂糖亲和层析柱，上样完毕后，杂交结合3小时。 | ||
| 搜索关键词： | pet15b pep vp3 质粒 构建 融合 蛋白 表达 | ||
【主权项】：
pET15b‑PEP‑1‑VP3质粒，其中以图1所示的pET15b为表达载体，PEP‑1‑VP3基因见序列表1中的核苷酸序列。
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