[发明专利]鹿结核病间接酶联免疫吸附检测法

摘要

鹿结核病间接酶联免疫吸附检测法属于兽医领域。克服以往鹿结核病检测特异性差，敏感性低等不足。所选用的生物材料有：牛型提纯蛋白衍生物(PPD)、兔抗鹿IgG，兔抗鹿IgG-HRP、标准阳性血清、标准阴性血清、待检血清。检测方法的步骤有包被抗原、加血清、加酶结合物-兔抗鹿IgG-HRP、加底物-兔抗鹿IgG、终止反应后用酶联免疫检测仪测量，在490nm处空白调零，测各孔的OD值；以PPD的OD值≥0.56为阳性。本发明的积极效果是：在首创完成兔抗鹿二抗的基础上，对鹿结核间接ELISA的诊断抗原进行筛选，以牛型提纯蛋白衍生物(PPD)作为最佳抗原并确立了最佳试验步骤和条件，建立一种特异性强，敏感性高，简便快捷，耗资少的鹿结核病诊断方法。

主权项

鹿结核病间接酶联免疫吸附检测法，其特征是：(1)使用的生物材料有：牛型提纯蛋白衍生物、兔抗鹿IgG、兔抗鹿IgG‑HRP、标准阳性血清、标准阴性血清、待检血清；(2)检测步骤是：①包被抗原在酶标板上选定试验孔、阴性对照孔、阳性对照孔、抗原对照孔、抗体对照孔、酶结合物对照孔、空白对照孔；将牛型提纯蛋白衍生物用抗原稀释液稀释成10‑50μg/ml后，等量加入上述各孔中。在35‑42℃湿盒内2‑4小时，包被后3×3′洗涤；②加血清用血清稀释液将待检血清按血清比稀释液1∶50‑1∶150的比例稀释，在待检血清孔中加待检血清、标准阳性对照孔和抗体对照孔加阳性血清，标准阴性血清对照孔加阴性血清，抗原对照孔加入血清稀释液，加入量均相同于步骤①所加抗原的体积量，在35‑42℃湿盒内孵育0.5‑1.5小时，3×3′洗涤。③加酶结合物‑兔抗鹿IgG‑HRP将兔抗鹿IgG‑HRP用抗原稀释液按兔抗鹿IgG‑HRP比稀释液1∶2000‑1∶8000的比例稀释，将兔抗鹿IgG‑HRP液加入全部待检血清孔和对照孔中，每孔加入量相同于步骤①加入的抗原液体积量，在35‑42℃湿盒内孵育0.5‑1.5小时，3×3′洗涤；④加底物‑兔抗鹿IgG在完成步骤③的酶标板上全部试验孔和对照孔中加兔抗鹿IgG，作为底 物反应，每孔加入量相同于步骤①加入的抗原液体积量，在35‑42℃湿盒内孵育10‑20分钟；⑤终止反应在完成步骤④的酶标板上全部待检血清孔和对照孔中加2摩尔质量硫酸终止反应；每孔加入量为步骤①加入的抗原液体积的1/2；⑥用酶联免疫检测仪测量将完成步骤⑤的培养板置于酶联免疫检测仪上，在490nm处空白调零，测各孔的OD值；以PPD的OD值≥0.56为阳性。