[发明专利]一种半成熟树突状细胞的体外制备方法

摘要

本发明公开了一种半成熟树突状细胞的体外制备方法，具体为收集小鼠骨髓细胞悬液，离心，裂解，细胞重悬于RPMI 1640完全培养基中，加入10-20μg/L rmGM-CSF、2.5-10μg/L rmIL-4和1-5mg/L Jagged-1/Fc，孵育，收集疏松贴壁细胞，用完全培养基重悬细胞，加入等剂量的rmGM-CSF、rmIL-4和Jagged-1/Fc，收集疏松贴壁细胞，第6-8d加入半剂量的rmGM-CSF和rmIL-4，等剂量Jagged-1/Fc，第10-12d收获疏松贴壁细胞，即semi-mature DCsJagged-1。这种细胞只用Jagged-1/Fc处理，能导致同种异基因淋巴细胞免疫应答的能力减弱，有利于诱导免疫耐受。

主权项

一种半成熟树突状细胞的体外制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)冰浴上收集小鼠骨髓细胞悬液，离心弃上清；(2)将步骤(1)离心得到的细胞重悬于PBS中，加入细胞悬液体积15‑20倍的红细胞裂解液，37.0℃避光作用8‑10min，然后离心；(3)将步骤(2)离心得到的细胞重悬于含10％胎牛血清的RPMI 1640完全培养基中；(4)在步骤(3)得到的细胞悬液中加入10‑20μg/L重组小鼠粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子rmGM‑CSF、2.5‑10μg/L重组小鼠白细胞介素4rmIL‑4和1‑5mg/L重组嵌合蛋白Jagged‑1/Fc；(5)置于培养箱中孵育；(6)隔天1次，重复以下操作：去除上层悬浮细胞，收集疏松贴壁细胞，离心弃上清，用含10％胎牛血清的RPMI 1640完全培养基重悬离心得到的细胞，加入同步骤(4)等剂量的rmGM‑CSF、rmIL‑4和Jagged‑1/Fc，然后置于培养箱中继续孵育；(7)第6‑8天开始，加入与步骤(4)相比半剂量的rmGM‑CSF和rmIL‑4，Jagged‑1/Fc剂量不变，其余同步骤(6)；(8)第10‑12天弃底层牢固贴壁细胞，收获疏松贴壁细胞，即Jagged‑1诱导的半成熟树突状细胞。